ТОР 5 статей: Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы КАТЕГОРИИ:
|
Демонстрация техники приготовления и окрашивания мазковСамостоятельная работа Контрольные вопросы
Задание Каждый студент должен: 1. Приготовить 2 мазка из бульонной бактериальной культуры 2. Высушить их, зафиксировать физическим способом 3. Окрасить один из них простым методом: - Нанести на стекло несколько капель метиленового синего - Выдержать 3-5 мин - Смыть краску водой - Высушить мазок на воздухе или фильтровальной бумагой - Микроскопировать с иммерсионным объективом и увеличением 900 –1000х 4. Второй мазок окрасить сложным методом (по Грамму, основной вариант).
5. Зарисовать в тетеради микроорганизмы, видимые в поле зрения.
Контрольные вопросы (письменный ответ в тетради):
Лабораторное занятие №3
МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В МИКРОБИОЛОГИИ (продолжение) Цель – ознакомление с методами окраски кислотоустойчивых и спорообразующих микроорганизмов.
Материалы и оборудование: бактериологическая петля, предметные стекла, пробирки, ватные пробки, спиртовка или газовая горелка, растворы красителей Окраска кислотоустойчивых микробов. Кислотоустойчивые микробы имеют в своем составе жироподобные вещества (липоиды), в частности, миколовые кислоты, с трудом окрашиваемые обычными анилиновыми красками. Однако будучи окрашены раствором карболового фуксина, они не теряют окраски при воздействии на них раствором неорганических кислот и спирта и не воспринимают цвет дополнительной контрастной окраски. Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена отражает особенности некоторых микобактерий и нокардий. Эти бактерии не окрашиваются обычными методами, однако если при окрашивании используются фенол, детергенты или нагревание, то окрашенные клетки получить удается. В этом случае окраска клеток сохраняется даже при последующем обесцвечивании в смеси кислота-спирт. Техника окраски по Циль-Нильсену. На фиксированный пламенем мазок кладут полоску фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовой раствор фуксина Циля и подогревают, не доводя до кипения. Краситель по мере испарения периодически добавляют, не давая препарату подсохнуть. При появлении паров нагревание прекращают через 2-3 мин., дав препарату остыть, снимают бумажку и сливают избыток краски. Препорат промывают водой и обесцвечивают, налив на мазок 5-10%-водный раствор серной кислоты на 3-5секунд (до появления желтоватого оттенка мазка). Мазок вновь тщательно промывают водой, споласкивают 960 спиртом, еще раз промывают водой и докрашивают в течении 3-5 минут метиленовой синькой Лёффлера. Обесцвечивание мазка серной кислотой можно заменить воздействием солянокислого алкоголя (960 этилового спирта, содержащего по объему 3% соляной кислоты), доведя оттенок препарата до слабо розоватого, затем промыть мазок водой и докрасить. Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые приобретают цвет дополнительной окраски, становятся синими. Эндоспоры бактерий. Спорообразование свойственно бактериям нескольких родов, к числу которых относятся Bacillus, Clostridium, Sporosarcina, Desufotomaculum, etc. Обычно внутри каждой клетки образуется одна спора, которая может размещаться центрально (у бацилл); субтерминально или терминально, превышая диаметр материнской клетки (у клостридий). Это приводит к формированию у кислостридий клеток веретеновидной формы (Clostridium perfringens), разливной ложки (Clostridium diauvoci), ракетки или барабанной палочки (Clostridium tetani). Бактериальные споры устойчивы к высокой температуре, высушиванию, воздействию токсических веществ и других неблагоприятных факторов. 1. Бактериальные споры могут быть выявлены с использованием как простых, так и сложных методов окраски. Например, с использованием 7% водного раствора нигрозина микроорганизм окрашивается в зеленый цвет, споры – бесцветные, а фон – черный. Окраска спор у бактерий по методу Циля. Приготовленный мазок высушивают на воздухе, фиксируют на пламени, покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят карболовый раствор фуксина Циля, и подогревают в течении 6-8 минут до образования паров (краску периодически добавляют, не давая мазку подсохнуть). После этого мазок тщательно промывают водой, и на 30-60 секунд наносят на него 1% раствор серной кислоты до приобретения слабо розовой окраски (при этом краситель вымывается из цитоплазмы вегетативных клеток, а споры остаются окрашенными). Обесцвечивание мазка серной кислотой можно заменить воздействием солянокислого алкоголя (960 этилового спирта, содержащего по объему 3% соляной кислоты), доведя оттенок препарата до слабо розоватого, затем промыть мазок водой и докрасить. После дифференциации мазок немедленно промывают и докрашивают раствором метиленовой синьки Леффлера в течении 5 минут, снова промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют, пользуясь иммерсионной системой. Споры окрашиваются фуксином в ярко-красный цвет, а концы клеток-спороносцев и бесспоровые палочки – в синий или голубой цвет метиленовой синьки. Метод окраски спор по способу Ауески. На приготовленный высушенный на воздухе мазок наливают 1-2% водный раствор соляной кислоты и подогревают на пламени до отхождения паров (3-4 раза). Затем препарат промывают водой, высушивают, фиксируют на пламени и окрашивают через фильтровальную бумагу карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течении 3-5 минут. Далее препарат обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течении нескольких секунд (до бледно-розовой окраски), промывают водой и дополнительно окрашивают раствором метиленовой синьки Леффлера в течении 2-х минут, промывают водой и высушивают. При микроскопии видны споры (красные) и вегетативные формы (синие). Материалы и оборудование: культуры споровых форм бактерий, фильтровальные бумажки размером 2X3 см, карболовый фуксин Циля, метиленовый синий, пинцеты.
ПРОВЕДЕНИЕ ЗАНЯТИЯ Теоретические вопросы окрашивания кислотоустойчивых и спорообразующих микроооганизмов 2. Демонстрация анимации «Окраска по Цилю-Нильсену» Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:
|