Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Демонстрация техники приготовления и окрашивания мазков




Самостоятельная работа

Контрольные вопросы

 

Задание

Каждый студент должен:

1. Приготовить 2 мазка из бульонной бактериальной культуры

2. Высушить их, зафиксировать физическим способом

3. Окрасить один из них простым методом:

- Нанести на стекло несколько капель метиленового синего

- Выдержать 3-5 мин

- Смыть краску водой

- Высушить мазок на воздухе или фильтровальной бумагой

- Микроскопировать с иммерсионным объективом и увеличением

900 –1000х

4. Второй мазок окрасить сложным методом (по Грамму, основной вариант).

 

 

 

5. Зарисовать в тетеради микроорганизмы, видимые в поле зрения.

 

Контрольные вопросы (письменный ответ в тетради):

  1. С какой целью мазки подвергаются фиксации? Способы фиксации.
  2. В каких случаях применяется химический метод фиксации препаратов?
  3. В какой цвет окрашиваются грамположительные и грамотрицательные бактерии?
  4. Каковы причины неудач при окрашивании по Граму?

 

 


Лабораторное занятие №3

 

МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В МИКРОБИОЛОГИИ (продолжение)

Цель – ознакомление с методами окраски кислотоустойчивых и спорообразующих микроорганизмов.

 

Материалы и оборудование: бактериологическая петля, предметные стекла, пробирки, ватные пробки, спиртовка или газовая горелка, растворы красителей

Окраска кислотоустойчивых микробов. Кислотоустойчивые микробы имеют в своем составе жироподобные вещества (липоиды), в частности, миколовые кислоты, с трудом окрашиваемые обычными анилиновыми красками. Однако будучи окрашены раствором карболового фуксина, они не теряют окраски при воздействии на них раствором неорганических кислот и спирта и не воспринимают цвет дополнительной контрастной окраски.

Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена отражает особенности некоторых микобактерий и нокардий. Эти бактерии не окрашиваются обычными методами, однако если при окрашивании используются фенол, детергенты или нагревание, то окрашенные клетки получить удается. В этом случае окраска клеток сохраняется даже при последующем обесцвечивании в смеси кислота-спирт.

Техника окраски по Циль-Нильсену. На фиксированный пламенем мазок кладут полоску фильтровальной бумаги, наливают на нее карболовой раствор фуксина Циля и подогревают, не доводя до кипения. Краситель по мере испарения периодически добавляют, не давая препарату подсохнуть. При появлении паров нагревание прекращают через 2-3 мин., дав препарату остыть, снимают бумажку и сливают избыток краски. Препорат промывают водой и обесцвечивают, налив на мазок 5-10%-водный раствор серной кислоты на 3-5секунд (до появления желтоватого оттенка мазка). Мазок вновь тщательно промывают водой, споласкивают 960 спиртом, еще раз промывают водой и докрашивают в течении 3-5 минут метиленовой синькой Лёффлера. Обесцвечивание мазка серной кислотой можно заменить воздействием солянокислого алкоголя (960 этилового спирта, содержащего по объему 3% соляной кислоты), доведя оттенок препарата до слабо розоватого, затем промыть мазок водой и докрасить.

Кислотоустойчивые бактерии окрашиваются фуксином в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые приобретают цвет дополнительной окраски, становятся синими.

Эндоспоры бактерий. Спорообразование свойственно бактериям нескольких родов, к числу которых относятся Bacillus, Clostridium, Sporosarcina, Desufotomaculum, etc. Обычно внутри каждой клетки образуется одна спора, которая может размещаться центрально (у бацилл); субтерминально или терминально, превышая диаметр материнской клетки (у клостридий). Это приводит к формированию у кислостридий клеток веретеновидной формы (Clostridium perfringens), разливной ложки (Clostridium diauvoci), ракетки или барабанной палочки (Clostridium tetani). Бактериальные споры устойчивы к высокой температуре, высушиванию, воздействию токсических веществ и других неблагоприятных факторов.

1. Бактериальные споры могут быть выявлены с использованием как простых, так и сложных методов окраски. Например, с использованием 7% водного раствора нигрозина микроорганизм окрашивается в зеленый цвет, споры – бесцветные, а фон – черный.

Окраска спор у бактерий по методу Циля. Приготовленный мазок высушивают на воздухе, фиксируют на пламени, покрывают полоской фильтровальной бумаги, на которую наносят карболовый раствор фуксина Циля, и подогревают в течении 6-8 минут до образования паров (краску периодически добавляют, не давая мазку подсохнуть). После этого мазок тщательно промывают водой, и на 30-60 секунд наносят на него 1% раствор серной кислоты до приобретения слабо розовой окраски (при этом краситель вымывается из цитоплазмы вегетативных клеток, а споры остаются окрашенными). Обесцвечивание мазка серной кислотой можно заменить воздействием солянокислого алкоголя (960 этилового спирта, содержащего по объему 3% соляной кислоты), доведя оттенок препарата до слабо розоватого, затем промыть мазок водой и докрасить.

После дифференциации мазок немедленно промывают и докрашивают раствором метиленовой синьки Леффлера в течении 5 минут, снова промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют, пользуясь иммерсионной системой.

Споры окрашиваются фуксином в ярко-красный цвет, а концы клеток-спороносцев и бесспоровые палочки – в синий или голубой цвет метиленовой синьки.

Метод окраски спор по способу Ауески. На приготовленный высушенный на воздухе мазок наливают 1-2% водный раствор соляной кислоты и подогревают на пламени до отхождения паров (3-4 раза).

Затем препарат промывают водой, высушивают, фиксируют на пламени и окрашивают через фильтровальную бумагу карболовым раствором фуксина при нагревании (до появления паров) в течении 3-5 минут. Далее препарат обесцвечивают 5% водным раствором серной кислоты в течении нескольких секунд (до бледно-розовой окраски), промывают водой и дополнительно окрашивают раствором метиленовой синьки Леффлера в течении 2-х минут, промывают водой и высушивают. При микроскопии видны споры (красные) и вегетативные формы (синие).

Материалы и оборудование: культуры споровых форм бактерий, фильтровальные бумажки размером 2X3 см, кар­боловый фуксин Циля, метиленовый синий, пинцеты.

 

ПРОВЕДЕНИЕ ЗАНЯТИЯ

Теоретические вопросы окрашивания кислотоустойчивых и спорообразующих микроооганизмов

2. Демонстрация анимации «Окраска по Цилю-Нильсену»






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных