СТЕРИЛИЗАЦИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

Питательные среды стерилизуют главным образом автоклавированием. Этот способ основан на прогревании субстрата насы­щенным паром при давлении выше атмосферного. Когда давление пара повышается, возрастает его температура (таблица).

Таблица. ТЕМПЕРАТУРА НАСЫЩЕННОГО ПАРА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ДАВЛЕНИЯХ

Совместное действие высо­кой температуры и пара обеспе­чивает надежность стерилиза­ции: при автоклавировании по­гибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов.

Автоклавирование проводят при различных режимах. Когда указывают режим стерилизации в единицах давления: 0,5; 1,0; 2,0 атм, — имеют в виду допол­нительное давление.

Режимы стерилизации сред. Температура и длительность автоклавирования определяются прежде всего составом питательной среды. Субстраты, содержащие вещества, не выдерживающие на­гревания до 120°, стерилизуют при 0,5 атм. Молоко, дрожжевой автолизат, дрожжевую воду и среды с желатиной стерилизуют при 0,5 атм в течение 15 мин. Среды, содержащие сахара и витамины, например сусло пивное, соки, стерилизуют при 0,5 атм 20—30 мин. Мясопептонный бульон и мясопептонный агар автоклавируют при 1 атм 20—30 мин, картофельную среду и почвенную вытяж­ку, при 1,5 атм 30 мин.

Выбирая режим стерилизации, необходимо учитывать рН сре­ды. В случае кислой реакции среды при автоклавировании могут подвергнуться гидролизу входящие в ее состав полимеры. Так, если рН среды ниже 6,5—6,0, то происходит пептонизация желатины, и среда после стерилизации не застывает. При рН ниже 5,0 частично гидролизуется и теряет способность образовывать гель агар-агар.

Если среда щелочная, то при стерилизации выпадают в осадок соли железа, карамелизуются и становятся недоступными для мик­роорганизмов сахара. Чтобы избежать этих явлений, среды, пред­назначенные для культивирования кислотолюбивых или щелочелюбивых микроорганизмов, стерилизуют при нейтральном значении рН и только после автоклавирования подкисляют или подщелачивают. Кроме того, растворы ряда компонентов часто стерилизуют отдельно при таком рН и в том режиме, при которых они не изменяются, a затем стерильно добавляют в среды в нуж­ном количестве.

СТЕРИЛИЗАЦИЯ СТЕКЛЯННОЙ ПОСУДЫ СУХИМ ЖАРОМ.

Материалы и оборудование: чашки Петри, воздушный стерилизатор, бумага. Сухим жаром стерилизуют стеклянную посуду в сушильном шкафу. Чашки Петри перед стерилизацией должны быть вымыты и высушены.

Ход работы: Чтобы избежать заражения простерилизованных предметов из воздуха, перед стерилизацией чашки Петри заво­рачивают в оберточную бумагу. Бумага нарезается в виде квад­рата, сторона которого приблизительно равна диаметру чашки. Чашку Петри помешают на средину листа, загибают его с двух противоположных сторон кверху так, чтобы края налегали друг на друга. Два свободных конца подгибают вниз. При таком обер­тывании у чашек легко различить верх и низ.

Подготовленные таким образом чашки Петри помещают в су­шильный шкаф, в котором нагревают их при температуре 160-170 °С в течение двух часов (с момента установления нужной температуры). При таком прогревании погибают не только ве­гетативные клетки, но и споры. Температуру в сушильном шкафу выше 175 ° С допускать не следует, так как при этом бумажная обертка становится ломкой.

Чашки Петри завертывают каждую отдельно, на можно завертывать вместе по 2—3 чашки. В концы пипеток вставляют ватные тампоны. Пипетки заворачивают в длинные по­лоски бумаги шириной 4—5 см. Обмотку начинают с конца, следя за тем, чтобы конец пипетки был тщательно завернут бумагой. Постепенным движением полоски бумаги по спирали оканчивают обмотку у про­тивоположного конца — того, который берется в рот. Завернутые пипетки перед стерилизацией по нескольку штук вместе заворачивают в бумагу или помещают в специальные металлические или картонные пеналы. Шпатели также заворачивают отдельно в бумагу. Колбы, пробирки закрывают ватными пробками, на колбу надевают бумажные колпачки, предохраняю­щие горлышко от пыли. Посуду, подготовленную для стерилизации, загру­жают в сушильный шкаф или в автоклав не слишком плотно, чтобы не затруднять циркуляции воздуха и обес­печить равномерный прогрев стерилизующегося мате­риала. Нельзя обертывать пробки сосудов целлофаном или другими материалами, не пропускающими пар. Пар дол­жен свободно проникать через пробку в сосуд, в про­тивном случае среды не прогреваются до нужной темпе­ратуры и стерилизации не происходит.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: