Задание 2. Исследовать и провести сравнительный анализ активности холинэстеразы в образцах сыворотки крови (титрование раствором NaOH).

Принцип метода. Холинэстераза катализирует реакцию гидролиза ацетилхолина с образованием холина и уксусной кислоты. В крови человека содержится два вида холинэстеразы. В сыворотке содержится неспецифическая псевдохолинэстераза, которая расщепляет не только ацетилхолин, но и эфиры холина. В эритроцитах содержится специфическая, истинная ацетилхолинэстераза, которая расщепляет только ацетилхолин.

Метод виявлення и количественного определения холинэстеразы основан на титровании щёлочью уксусной кислоты, которая выделилась в процессе гидролиза ацетилхолина. Количество щёлочи, использованной на титрование, является мерою активности фермента.

Ход работы. Берут две пробирки. В одну отмеряют 0,5 мл сыворотки крови № 1, в другую – 0,5 мл сыворотки крови № 2. Потом в обе пробирки с исследуемыми сыворотками добавляют по 2 мл 2%-го раствора ацетилхолина и инкубируют при 37^оС 10 минут. После этого добавляют по 2 капли фенолфталеина и титруют содержимое пробирок 0,1 М раствором NaOH до появления слабо-розовой окраски.

Количество щёлочи, использованной на титрование, является мерой активности фермента.

Заполняют таблицу:

По результатам проведенного эксперимента делают вывод.

Клинико-диагностическое значение. Определение активности холинэстеразы сыворотки крови используется для диагностики ряда заболеваний, в частности инфаркта миокарда, вирусного гепатита, злокачественных опухолей печени и т.п. Перечисленные заболевания сопровождаются значительным снижением активности холинэстеразы сыворотки крови.

Литература

Основная:

1. Хмелевский Ю.В, Губский Ю.И., Зайцева И.Д. и др. Биологичес­­­кая химия: Практикум. - К.: Вища шк., 1985. - 212 с.

2. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 2000. - 704с.

Дополнительная:

1. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. В 2 т. – М.: Мир, 1982.

2. Ленинджер А. Основы биохимии. В 3 т.- М.: Мир, 1985.- 1056 с.

3. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека: В 2 т. - М.: Мир, 1993. - т.1 - 381 с.; т.2 - 414 с.

4. Фёршт Э. Структура и механизм действия ферментов. – М.: Мир. – 1980. – 364 с.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: