Практические работы. Задание 1.Определить содержание аскорбиновой кислоты в моче (по реакции йода с крахмалом).

Задание 1. Определить содержание аскорбиновой кислоты в моче (по реакции йода с крахмалом).

Принцип метода. Для оценки С- витаминной обеспеченности организма наибольшее распространение получили прямые методы определения аскорбиновой кислоты в крови и моче. Концентрация витамина в плазме крови и выведение его с мочой находится в тесной взаимосвязи и является показателем обеспеченности организма человека витамином С.

Аскорбиновая кислота в кислой среде восстанавливает молекулярный йод. Появление синей окраски указывает на то, что вся аскорбиновая кислота из восстановленной формы перешла в окисленную и первая лишняя капля раствора йода в присутствии крахмала даёт синюю окраску.

Ход работы. В колбу отмеряют 5 мл мочи и добавляют 5 капель 1%-го раствора крахмала. Титруют раствором йода до появления синей окраски, не исчезающей в течение 30 секунд.

Учитывая, что 1 мл раствора йода восстанавливает 1 мкмоль аскорбиновой кислоты, вычисляют выделение аскорбиновой кислоты за сутки по формуле:

Х = а ´ 1 ´ 1500 / 5

где а – количество мл раствора йода, пошедшего на титрование; 1500 – суточный диурез; 5 – объём мочи в пробе; Х – содержание аскорбиновой кислоты в суточном количестве мочи.

В норме за сутки с мочой выделяется 284-568 мкмоль аскорбиновой кислоты.

Задание 2. Определить содержание аскорбиновой кислоты в плазме крови как показатель обеспеченности организма витамином С.

Принцип метода. Аскорбиновая кислота в определённых условиях легко отдаёт пару электронов и протонов, следовательно, является сильным восстановителем.

Количественное определение витамина С основано на способности аскорбиновой кислоты восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол (ДХФИФ). Раствор 2,6-ДХФИФ в нейтральной среде синего цвета. Пока в растворе есть аскорбиновая кислота, 2,6- ДХФИФ восстанавливается и при этом обесцвечивается. После окисления всей аскорбиновой кислоты, излишек 2,6-ДХФИФ окрашивает раствор в кислой среде в слабо розовый цвет.

Ход работы. К 0,5 мл плазмы крови добавляют такое же количество дистиллированной воды, 1,0 мл 5%-го раствора метафосфорной кислоты и титруют раствором 2,6-ДХФИФ из микробюретки до появления розовой окраски. Титрование прекращают и отмечают количество раствора 2,6- ДХФИФ, пошедшего на титрование.

Расчёт проводят по формуле:

Х = а ´ 0,045 ´ 1000 / 0,5

де Х – содержание аскорбиновой кислоты в плазме крови; а – количество 2,6-ДХФИФ, израсходованного на титрование; 0,045 – количество мкмоль аскорбиновой кислоты, соответствующее титру раствора 2,6-ДХФИФ; 0,5 – количество плазмы, взятой для анализа; 1000 – расчёт на 1 л крови.

В норме в плазме крови содержится 34,1 – 90,9 мкмоль аскорбиновой кислоты.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: