Выделение и очистка белка

Изучение белков любого биологического объекта начинается с их выделения и, хотя бы, частичной очистки.

1этапа выделения белков – это р азрушение клеточной структуры материала.

В результате этой операции обеспечивается дальнейшее наиболее полное извлечение белков. Разрушение клеточной структуры можно проводить различными способами. Выбор того или иного способа зависит от объекта задач исследования.

Например: растирание в ступке. Для этой цели часто используются приборы – гомогенизаторы различного устройства, ультразвуковые дезинтеграторы.

При выборе разрушения клеточной структуры биологического материала надо помнить, что интенсивное механическое воздействие может вызвать денатурационные изменения в белках.

2 этап – э кстракция белков (извлечение). Этот этап позволяет извлекать белки из биологического материала, т.е. переводить их в раствор.

Выбирая различные экстракты и подбирая режимы экстракции (время, температура, рН и т.п.) можно избирательно перевести в раствор разные группы белков.

Например: водой извлекаются альбумины, 10% -ным раствором хлорида натрия – глобулины, 60-80% -ным раствором этанола – проламины и слабыми щелочными растворами (0,2%-ный раствор едкого натрия) – глютелины.

Для полного извлечения белка обычно проводится трехкратная экстракция биологического материала.

3 этап – о саждение белка. Выбор способа и режима осаждения определяется поставленной задачей и индивидуальными особенностями объекта исследования.

а) Осаждение белков раствором трихлоруксусной кислоты (ТХУ) позволяет отделить белки от пептидов и аминокислот, но при этом происходит необратимая денатурация белка.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: