Задание к лабораторной работе. 8.2.1 Приготовить микропрепараты из подготовленных различными способами проб молока.

8.2.1 Приготовить микропрепараты из подготовленных различными способами проб молока.

Методика выполнения работы.

Молоко необходимо разлить в колбы объёмом 100 мл приблизительно по 40-50 мл, закрыть их ватными пробками. Параллельно осуществляют второй вариант опыта. Разлив молоко в колбы, закрывают их ватными пробками, доводят молоко до кипения. Колбы с кипяченым и некипячёным молоком ставят в термостат при температуре 30 ⁰С.

Через 10-12 ч свежее (некипяченое) молоко скисает. В колбе образуется плотный, ровный сгусток без следов газа. Сгусток образуется вследствие того, что молочная кислота реагирует с казеинатом кальция и кальций выпадает в осадок.

В кипячёном молоке молочно-кислые бактерии, поскольку они не образуют спор, погибают, споры же масляно-кислых бактерий сохраняются. При инкубации в термостате они прорастают, осуществляя масляно-кислое брожение лактозы. В результате реакции масляной кислоты с казеинатом кальция в этом варианте в осадок выпадает казеиновая кислота. В дальнейшем она подвергается пептонизации; осадок переходит в кремовую жидкость с неприятным запахом масляной кислоты (запах пота) и прогорклым вкусом.

1 Из прокисшего молока готовят микропрепарат. Бактериологической петлёй извлекают сгусток, размазывают его на предметном стекле очень тонким слоем без воды.

2 Сушат на воздухе

3 Фиксируют смесью спирта с эфиром (примерно 1:1), несколько раз нанося смесь на мазок и сливая её. При такой фиксации бактерии не только погибают и прикрепляются к стеклу, но и, параллельно, эфиром извлекается и удаляется жир. Это необходимо, поскольку капли жира на препарате мешают окраске и микроскопированию.

4 Фиксированный препарат окрашивают метиленовым синим в течение 2-3 мин

5 Промывают водой

6 Высушивают и микроскопируют с иммерсией.

Метиленовый синий – лучший краситель для молочно-кислых бактерий, так как он слабо окрашивает основной фон (казеин) и хорошо окрашивает клетки бактерий. Получаются наиболее четкие препараты.

8.2.2 Полученные результаты зарисовать, сделать выводы.

В микропрепарате чаще преобладают мелкие округлые клетки Streptococcus lactis, соединенные в короткие цепочки. Этот микроорганизм является возбудителем естественным скисанием молока в наших широтах. Оптимальная температура его развития – 30 ⁰С. Он накапливает до 1 % молочной кислоты.

Нередко в препарате наблюдаются тонкие палочки рода Lactobacterium, варьирующие в размере, иногда содержащие зерна волютина. Чаще встречается Lactobacterium bugaricum – возбудитель естественного скисания молока в южных широтах. Оптимальная температура его развития – 40 ⁰С. Кислотоустойчив, он накапливает до 3,5 % молочной кислоты.

Если на поверхности скисшего молока появляется плёнка, то в мазке обнаруживается так же и молочная плесень, четырехугольные или овальные клетки которой отличаются от молочно-кислых своими размерами.

8.2.3 Скисшие образцы проверить на наличие молочной кислоты.

Наличие молочной кислоты в скисших образцах можно подтвердить качественными реакциями.

Методика выполнения работы.

В коническую колбу объёмом 100 мл берут 5 мл фильтрата, добавляют 2 мл крепкой серной кислоты, и нагревают при взбалтывании до начала кипения. Затем, продолжая кипячение и помешивание, пипеткой по каплям приливают 5 мл 5 % р-ра КМnО₄, который обесцвечивается. В этих условиях молочная кислота переходит в уксусный альдегид.

Для распознавания уксусного альдегида быстро покрывают горлышко колбы фильтровальной бумагой, смоченной аммиачным раствором АgNО₃. Аккуратно, чтобы не разорвать фильтровальную бумагу, прижимают её к краям горла колбы, продолжая нагревание. Уксусный альдегид улетучивается и, реагируя с аммиачным раствором АgNО₃, вызывает почернение бумаги с серебристой побежалостью. Так выделяется металлическое серебро.

8.2.4 Учесть результаты реакции и занести в таблицу (таблица 3).

Таблица 3 - Протокол исследования

Вопросы к защите лабораторной работы

1 На какие виды в зависимости от соотношения получаемых конечных продуктов подразделяется молочно-кислое брожение?

2 Что является продуктом брожения гомоферментативных молочно-кислых бактерий

3 Какой продукт образуется в результате брожения гетероферментативных молочно-кислых бактерий?

4 Охарактеризуйте молочно-кислые бактерии.

5 Какими по морфологии могут быть молочно-кислые бактерии?

6 Какой антибиотик вырабатывается некоторыми молочно-кислыми бактериями?

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: