Техника безопасности

1. Будьте внимательны при использовании растворов щелочи натрия, соляной кислоты, концентрированной азотной кислоты и молибденового реактива.

2. Соблюдайте правила пожарной безопасности, работая с песочной баней.

РАБОТА 13. КАЧЕСТВЕННЫЕ РЕАКЦИИ НА ПРОДУКТЫ ГИДРОЛИЗА НУКЛЕОПРОТЕИДОВ ДРОЖЖЕЙ

Нуклеопротеиды – сложные белки, простетической группой

которых являются нуклеиновые кислоты. Для качественного анализа химического состава нуклеопротеидов могут быть использованы дрожжи, богатые этими сложными белками. Продукты кислотного гидролиза нуклеопротеидов дрожжей обнаруживают специфическими качественными реакциями.

Ход работы.

1. Взвешивают 2,5 г пекарских дрожжей. Навеску помещают в колбочку и добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты. Колбочку закрывают пробкой, в которую вставлен обратный холодильник, и ставят на песочную баню. Через 1 час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают. После охлаждения гидролизат фильтруют через бумажный фильтр.

2. С фильтратом проделывают качественные реакции на составные части нуклеопротеидов:

а) Биуретовая реакция на полипептиды.

К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10% раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1% раствора сульфата меди. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.

б) Серебряная проба на пуриновые основания.

К 10 каплям гидролизата добавляют по каплям концентрированный раствор аммиака до щелочной реакции (проверить по индикаторной бумажке, опущенной в пробирку), затем 10 капель 2% аммиачного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3-5 минут выпадает рыхлый осадок серебряных соединений пуриновых оснований (аденина и гуанина), окрашенный в светло-коричневый (бурый) цвет.

в) Проба Молиша на пентозу.

К 10 каплям гидролизата добавляют 3 капли 1% спиртового раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают 20-30 капель концентрированной серной кислоты. После перемешивания развивается красное окрашивание, обусловленное продуктом конденсации тимола с фурфуролом, образовавшимся из пентозы.

г) Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу.

К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 30% раствора гидроксида натрия и 1-3 капли 7% раствора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди (II); перемешивают. При нагревании до кипения выпадает желтый осадок гидроксида меди (I) или красный осадок оксида меди (I).

д) Качественная реакция на рибозу и дезоксирибозу с дифениламином.

Дифениламин дает синее окрашивание с дезоксирибозой и зеленое - с рибозой. К 5 каплям гидролизата добавляют 20 капель 1% раствора дифениламина и пробирку ставят в кипящую водяную баню на 15 минут. Развивается сине-зеленое окрашивание.

е) Качественная реакция на углеводы с a-нафтолом.

К 5 каплям гидролизата добавляют 3 капли 0,2% спиртового раствора a-нафтола и 20 капель концентрированной серной кислоты. Появляется розово-фиолетовое окрашивание.

ж) Молибденовая проба на фосфорную кислоту.

К 10 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят. При этом жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. Пробирку сразу охлаждают в струе холодной воды. На дне пробирки появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорно-молибденово-кислого аммония.

Оформление работы

1. Зарисовать прибор для гидролиза.

2. Результаты работы записать в виде таблицы:

Техника безопасности

1. В работе используются реактивы, требующие осторожного обращения: 10% серная кислота, 10% и 30% гидроксид натрия, концентрированная серная кислота и гидроксид аммония, молибденовый реактив (содержит концентрированную азотную кислоту).

2. Соблюдайте правила пожарной безопасности, пользуясь песочной и водяной баней.

РАБОТА 14. ВЫДЕЛЕНИЕ ДЕЗОКСИРИБОНУКЛЕОПРОТЕИДА ИЗ СЕЛЕЗЕНКИ

Дезоксирибонуклеопротеиды (ДНП) выделяют из тканей, богатых клеточными ядрами (селезенки, зобной железы и др.). ДНП нерастворимы в воде, но хорошо растворяются в щелочных и солевых растворах, поэтому при нейтрализации щелочных растворов или при разведении водой солевых растворов они выпадают в осадок.

Ход работы.

1. 0,5 г селезенки (или зобной железы) растирают в фарфоровой ступке со 100 мг стеклянного порошка, постепенно добавляя небольшими порциями 15 мл 5% раствора хлорида натрия. Затем содержимое ступки фильтруют через двойной слой марли.

В химический стакан вместимостью 150 мл наливают

60-90 мл дистиллированной воды и медленно, при непрерывном помешивании стеклянной палочкой вливают в воду полученный фильтрат. Нерастворимые в воде ДНП выпадают в осадок в виде нитей, наматывающихся на палочку. Выделенные ДНП осторожно вынимают вместе с палочкой, переносят в чистую пробирку и растворяют в 1-2 мл 0,4% раствора гидроксида натрия.

ПРИМЕЧАНИЕ. Если нити ДНП не образовались, а выделился хлопьевидный осадок, то ему дают отстояться, после чего большую часть жидкости из стакана осторожно сливают, оставшуюся часть центрифугируют.

2. С полученным раствором ДНП делают качественные реакции на белок и ДНП:

а) Биуретовая реакция на белок.

К 10 каплям ДНП добавляют 10 капель 10% раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1% раствора сульфата меди. Раствор окрашивается в сине-фиолетовый цвет.

б) Реакция с дифениламином на дезоксирибозу.

К 10 каплям раствора ДНП добавляют 20 капель дифениламинового реактива (дифениламин, растворенный в ледяной уксусной кислоте с добавлением концентрированной серной кислоты), перемешивают и ставят в кипящую водяную баню на 5-10 минут. Жидкость постепенно приобретает синее окрашивание, обусловленное реакцией дифениламина с дезоксирибозой.

Оформление работы

Записать принцип использованного метода выделения ДНП и результаты качественных реакций.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: