Осаждение белков спиртом, ацетоном и хлороформом

Органические растворители осаждают белки из нейтрального или слабокислого раствора. Они вытесняют белки из водных растворов. Механизм действия спирта и других органических растворителей можно объяснить дегидратацией мицелл белка, что ведет к понижению устойчивости их в растворе. Если в растворе белка присутствуют соли (NaCl), осадок образуется быстрее вследствие снятия заряда с коллоидной частицы. Это явление еще больше снижает устойчивость раствора белка.

Если осаждение проводить на холоде и осадок быстро отделить от спирта (хлороформа), то белок может снова раствориться в воде, т.е. свойства его при этом не изменяются, денатурация не успевает произойти, и осаждение обратимо. При длительном стоянии со спиртом белок денатурирует и становится нерастворимым в первоначальном растворителе.

Приборы. Штатив с пробирками.

Реактивы. Раствор белка для реакций осаждения. Этиловый спирт, 96%-ный раствор. Ацетон. Хлороформ. Хлорид натрия, кристаллический.

Ход работы. В три пробирки наливают по 1 мл раствора белка, ложечкой добавляют немного (0,2-0,3г) хлорида натрия и энергично встряхивают.

В первую пробирку постепенно (каплями) приливают 1 мл спирта, во вторую – 1 мл ацетона и в третью – хлороформа. Энергично встряхивают и через 3-6 мин наблюдают выпадение мелкого осадка белка.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: