Основная часть аттестационного отчета - личная работа за 2015год.

Значительную часть моей работы, как фельдшера-лаборанта, составляют цитогенетические исследования крови и пунктатов костного мозга у больных с заболеваниями системы крови.

Я, Лабкова Т.М., находясь в должности фельдшера-лаборанта лаборатории молекулярной генетики гематологической клиники ФГБУ РНИИГТ ФМБА России, владею следующими методами исследований:

1.культивирование и обработка клеток костного мозга.

2.культивирование и обработка лимфоцитов периферической крови

3. Диффференциальная окраска препаратов хромосом (G-bandin)

4.ПЦР исследование

5. FISH исследование.

ЦИФРОВОЙ ОТЧЕТ

о проделанной работе за период 2015г.

Количество исследований выполненных в лаборатории в период 2014-2015г.г.

Таким образом, наблюдается динамика увеличения количества выполненных исследований за отчетный период.

Методики цитогенетических исследований используются в моей ежедневной практической работе как на этапах диагностики, так и контроля эффективности лечения у больных гемобластозами.

Цитогенетическое исследование костного мозга

Методика

Костный мозг обладает высокой спонтанной митотической активностью и поэтому его биоптат непосредственно используют для приготовления хромосомных препаратов. Костный мозг (не менее 1 мл) отбирают в стерильный флакон типа вакутейнер с напылением гепарина. Далее подсчитывают число ядерных клеток. Пробу считают адекватной, если количество миелокариоцитов составляло не менее (15 – 20)×10⁹ /мл. Зная число клеток в исходной суспензии, точно разделяют материал на две или более культур, выдержав оптимальную концентрацию – 2×10⁹/мл клеток на 1 мл среды RPMI – 1640, дополненной 20% эмбриональной телячьей сывороткой, антибиотиком, глутамином (292,3 мг/л). В момент посадки культуры добавляют колцемид. Клетки костного мозга культивируются в течение 24 часов при температуре 37’С в термостате, что обеспечивает получение необходимого для исследования количества качественных метафазных пластин..

Полученный материал делят на две пробирки и центрифугируют в течение 10 минут при 1000 об\мин. После удаления надосадочной жидкости, полученную клеточную суспензию обрабатывают гипотоническим раствором хлорида калия в течение 30 минут при температуре 37'С. По нашей модификации, остановку воздействия гипотонического раствора производят 5% уксусной кислотой, а не фиксатором, состоящим из 3 частей метанола и 1 части ледяной уксусной кислоты. Это позволяет более щадяще воздействовать на клетки. После центрифугирования и удаления надосадочной жидкости материал подвергают 3-4 кратной фиксации по 10 минут смесью метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3:1 при комнатной температуре. После этого полученную суспензию клеток наносят на холодные обезжиренные предметные стекла.

После высушивания препаратов хромосом в течение 1 суток в термостате при температуре 37˚С, выполняется процедура дифференциальной окраски на G-диски по методу Seabright (Seabrigh, 1971; ISCN, 2005) [17]. Для этого препараты обрабатывают 0,25% раствором трипсина, нагретым до 37˚С в течении 2-10 секунд и промывают в трех сменах дистиллированной воды. Затем стекла покрывают краской Гимзы, разведенной на фосфатном буфере (ph = 6,8) и промывают под проточной водой. После высушивания препаратов при комнатной температуре, анализируют качество окраски хромосом под световым микроскопом. Время обработки препаратов хромосом раствором трипсина в каждом наблюдении подбирается индивидуально. В каждом наблюдении окрашивается 5-10 стекол.

Известно, что при цитогенетическом исследовании клеток костного мозга больных гемобластозами исследователь сталкивается с определенными трудностями: плохое качество метафазных пластин, недостаточное их количество, либо отсутствие митозов. Модифицированный нами метод позволяет улучшить качество и увеличить количество метафазных пластин, пригодных для анализа, что обеспечивает возможность определения кариотипа у 95% больных гемобластозами.

В каждом отдельном случае анализируется 20-30 метафазных пластин. При обнаружении патологической клетки анализируются все имеющиеся митозы для подтверждения клональности хромосомных аберраций и установления процентного соотношения между нормальным и патологическим клонами клеток. Если одни и те же структурные нарушения кариотипа или дополнительные хромосомы обнаружены в двух и более клетках, а потери хромосом – в трех, констатируется патологического клона клеток (Secker-Walker, 1990). Интерпретацию патологии кариотипа производят в соответствии с Международной номенклатурой дифференциально сегментированных хромосом (ISCN, 2005).

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: