Молекулярно-цитогенетический метод (FISH)

-Флюоресцентная гибридизация на стеклах

На суспензии костного мозга и преиферической крови

-гистологический FISH

На парафиновых срезах с блоков опухолей (лимфоузлов)

FISH на суспензии клеток периферической крови/костного мозга

Методика:

1 день

Отцентрифугировать эппендорф с суспензией в микроцентрифуге 5 минут/1000 оборотов.

В отдельном эппендорфе разбавить осадок фиксатором.

Нанести осадок пипеткой на стекло (адгезивное, с поли–L- лизином).

Положить стекло на термоплату (предварительно нагреть до 65°С). Подождать пока высохнет.

Разметить под микроскопом участок (в поле зрения должно быть не менее 200 клеток).

Приготовить пробу (4 мкл – буфер, 0,5 мкл – дистиллированная вода, 0,5 мкл – зонд).

Нанести пробу, положить сверху покровное стекло, заклеить клеем.

Денатурация 73°С 2 минуты, гибридизация 37°С не менее 17 часов.

2 день

Предварительно нагреть баню до 72 - 73°С.

Приготовить раствор 0,4 SSC (1 мл 20 SSC/49 мл дистиллированной воды – на 1 сосуд коплина).

Снять клей, покровное стекло, поместить в 1 сосуд коплина в баню на 2 минуты.

Продолжить отмывку во втором сосуде коплина при комнатной температуре 2 минуты.

Приготовить DAPII (190 мкл вектошейлд/10 мклDAPII).

Нанести 8 мкл, накрыть покровным стеклом.

FISH на мазках периферической крови/костного мозга/отпечатках опухоли

1 день

Поместить мазки в фиксатор на 1 час.

Высушить на воздухе 15-20 минут.

Нагреть баню до температуры 37°С.

Приготовить сосуд коплина с раствором пепсина, активированного HCl (50 мл дистиллированнй воды, 100 мкл стокового раствора пепсина (100 мг пепсина/1 мл дистиллированной воды), 2-3 капли HCl) и сосуд коплина с раствором 2 SSC (5 мл 20SSC/45 мл дистиллированной воды). Поставить в баню.

Поместить стекло в сосуд коплина с активированным пепсином на 2 минуты, затем в раствор 2SSC на 20 минут.

Провести по спиртам (70%, 85%, 100%) по 2 минуты в каждом.

Высушить на воздухе.

Разметить участок, нанести пробу.

2 день

Предварительно нагреть баню до 72 - 73°С.

Приготовить раствор 0,4 SSC (1 мл 20SSC/49 мл дистиллированной воды – на 1 сосуд коплина).

Снять клей, покровное стекло, поместить в 1 сосуд коплина в баню на 2 минуты.

Продолжить отмывку во втором сосуде коплина при комнатной температуре 2 минуты.

Приготовить DAPII (190 мклвектошейлд/10 мклDAPII).

Нанести 8 мкл, накрыть покровным стекло.

Дальше происходит оценка результата. При исследовании каждого зонда анализируется 200 интерфазных ядер. Интерпретация патологии кариотипа и полученных результатов производится в соответствии с Международной номенклатурой.

Лабраотория оснащена следующим оборудованием:

Ламинарный бокс

Вытяжной шкаф

Термостат

Центрифуги

Микроцентрифуги

Микротермостат

Водяная баня

Дистиллятор

Холодильники

В лаборатории ведется мной следующая учетно-отчетная документация:

Журнал учета гематологических пациентов

Журнал по учету и хранению реактивов

Журнал учета аварийных ситуаций и травм мед.персонала

Журнал регистрации и контроля работы бактерицидной лампы

Журнал отходов класса «Б»

В своей работе я руководствуюсь следующими регламентирующими документами:

-СанПиН 2.1.3.2630-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к организациям,осуществляющим медицинскую деятельность»;

-СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами»;

СП 3.1.2.3114-13 «Профилактика туберкулеза»;

СП 3.1.3263-15 «Профилактика инфекционных заболеваний при эндоскопических вмешательствах»;

СП 3.1.5.2826-10 «Профилактика ВИЧ- инфекций»;

СП 3.1.1.2341-08 «Профилактика вирусного гепатита B»

Заключение

За отчетный период проделана большая лабораторная работа. За 2015г. мной лично выполнено 2807 цитогенетических исследований костного мозга, цитогенетическое исследование клеток периферической крови 1461, FISH исследование 738, ПЦР исследование 3750.

В дальнейшем планирую продолжить работу по специальности «лабораторная диагностика»в молекулярно- цитогенетической лаборатории,связанную с диагностикой различных заболеваний системы крови.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: