Антиидиотипические антисыворотки

Идиотипическими детерминантами называют антигенные детерминанты, локализованные на вариабельных областях цепей иммуноглобулинов. Идиотоп – это единичная детерминанта, а вся группа идиотопов отдельно взятого вариабельного домена составляет идиотип. Во многих случаях не известно, обнаруживается ли при использовании данной антисыворотки один или более идиотопов, и поэтому большинство исследователей называют антисыворотки к вариабельным областям цепей антиидиотипическими.

Вследствие весьма существенного разнообразия структур вариабельных доменов число идиотипов, которые может экспрессировать индивидуальное животное, очень велико. Это позволяет широко использовать антисыворотки к идиотипическим детерминантам для обнаружения и сравнения вариабельных областей.

Теоретически любой экспонированный участок вариабельной области тяжелых и легких цепей может быть иммуногенным. Описаны как идиотипы, локализованные лишь на V_l - или V_н -цепях, так и идиотипы, получающиеся в результате комбинации V_L -цепей с V_н -цепями. Идиотипические детерминанты обнаружены в участках связывания антигена и на каркасных участках. Поэтому нелегко вывести общие закономерности об идиотипических детерминантах.

Поскольку потенциально идиотипических детерминант у иммуноглобулиновой молекулы очень много, то большинство антиидиотипических антисывороток, скорее всего, полиспецифично, что вносит дополнительные сложности в изучение идиотипов.

Впервые о наличии в иммуноглобулинах общих и индивидуальных антигенных детерминант сообщили Канкель, JIoccи сотрудники около тридцати лет назад [29]. К середине 60-х годов стало очевидно, что индивидуальные антигенные детерминанты характерны для вариабельных доменов. Антисыворотки, полученные к гомогенным миеломным белкам человека, после тщательного истощения другими миеломными белками и нормальными сывороточными иммуноглобулинами все-таки сохраняли способность к связыванию иммуногена. Используя подобный подход, Канкель установил, что должно быть всего, по меньшей мере, 10⁷ вариантов вариабельных областей иммуноглобулинов человека. Удэн, получая обычным способом антитела к вариабельным участкам, показал, что существуют идиотипы, общие для антител разной специфичности [29]. Таким образом, хотя первоначально предполагалось, что идиотип является уникальной характеристикой отдельного клона, позднее понятие это расширилось, и к одному идиотипу стали относить семейства антител с одинаковой или различной специфичностью, но с одинаковыми идиотипическими свойствами.

Рисунок 2. Приготовление антиидиотипических антисывороток

В данном примере (рисунок 2) кролики были иммунизированы мышиным миеломным белком, специфичным к ФХ. В антисыворотке содержались антитела к детерминантам C_l-, С_н-, V_l- и V_н -областей.

На рисунке 2(А) показано, что антитела к константным областям могут быть удалены из антисыворотки преципитацией нормальными иммуноглобулинами мыши (как показано на схеме) либо абсорбцией на этих же иммуноглобулинах, фиксированных на нерастворимом носителе. Остающиеся антитела специфичны к идиотипическим детерминантам.

На рисунке 2(Б) показано, каким образом можно очистить антиидиотипические антитела и отделить антитела к идиотипам, локализован­ным в антигенсвязывающем участке, от антител к идиотипам, лежащим вне его (обозначены как антитела к каркасным участкам). Антитела к идиотипическим детерминантам и детерминантам константных областей адсорбируют на колонке с иммуносорбентом, содержащим ковалентно связанный иммуноген. Антитела к идиотипу антигенсвязывающего участка избирательно элюируют с колонки гаптеном, специфическим к участку связывания иммуногена. Этот гаптен конкурирует за участок связывания с антителами к указанному идиотипу.

Для получения антисывороток к вариабельным участкам цепей миеломных белков использовали различные подходы: один из них изображен на рисунке 2(А). Как правило, иммунизацию проводят миеломным белком, а истощение – нормальной сывороткой или другим миеломным белком с такими же константными, но с отличающимися вариабельными областями цепей. В результате должна получаться антисыворотка против всех тех идиотипических детерминант иммуногена, которых почти нет у иммуноглобулинов нормальной сыворотки или у миеломных белков, использованных для истощения.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: