Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Заливка ткани в целлоидин




Целлоидин — хорошо растворяющаяся в эфире нитроклетчат­ка. В гистологической практике применяют 2 %, 4 % и 8 % рас­творы целлоидина, которые готовят из целлоидиновых пластин или отмытой от эмульсии и высушенной рентгеновской пленки.

Для приготовления 500 мл 2 % раствора целлоидина 10 г сухого целлоидина заливают 250 мл 100 % спирта и оставляют на 1 сут, затем добавляют 250 мл безводного эфира, который растворяет набухший в спирте целлоидин. Для приготовления 4 % и 8 % растворов количество целлоидина увеличивают со­ответственно в 2 и 4 раза. Растворы хранят в плотно закрытой посуде.

Заливка ткани в целлоидин стала в настоящее время менее популярной, чем парафиновая, и ее применяют главным обра­зом для обработки труднорежущихся тканей и объектов боль­ших размеров, с которых трудно получить хорошие парафино­вые срезы. Целлоидиновую заливку используют также в тех случаях, когда необходимо избежать воздействия на исследуе­мый материал высоких температур. Кроме того, заливка мате­риалов в целлоидин позволяет получить лучшие результаты при наличии в объектахбольших полостей, лакун и слоев различ­ной консистенции.

Эфир и сухой целлоидин огнеопасны, поэтому при работе с ними необходима осторожность.

Обезвоженный материал помещают в смесь 100 % спирта с эфиром (1:1) на 4—6ч, переносят в 2 % раствор целлоидина на 2—3 дня, затем в 4 % и 8 % растворы на 5—7 дней в каждый. Пропитанный кусочек заливают свежим 8 % целлоидином и уп­лотняют в парах хлороформа (в эксикаторе). Уплотненный таким образом материал заливают 70 % спиртом для хранения. Вырезанные блоки наклеивают густым целлоидином на дере­вянные колодки на 1 суток перед резкой.

 

  Заливка в целлоидин по Меркулову Заливка в целлоидин по Ромейсу
Фиксация: Формалин10% 24 ч Жидкость Карнуа 2 – 4 ч Спирт 96 % 12 ч Промывание в воде после формалина 24—48 ч  
Обезвоживание: Спирт 96 % 24 ч Спирт 100% 24 ч Спирт-эфир(1:1) 4 – 6 ч Целлоидин 2% 2 д Целлоидин 4% 2 д Целлоидин 8% 8 д Целлоидин 16% уплотнение в фиксаторе до образования поверхностной корочки в парах хлороформа. Спирт 70% хранение
Заливка в целлоидин Спирт 100 % +эфир(1:1) 6 –24ч Целлоидин 2 % 2 - 4 дня Целлоидин 4 % 2 – 4 д Целлоидин 8— 10% 1 – 2 д Хлороформ 2 – 3 д Спирт 70 % хранение

Особенности заливки в целлоидин крупных объектов

Целлоидиновая заливка, так же как и заливка в парафин, позволяет получать гистотопографические срезы. Пластины ткани органа толщиной 1 см кладут между двумя проволочными сетками (как для заливки в парафин), фиксируют, промывают и обезвоживают. Общая продолжительность процесса заливки в целлоидин крупных объектов 2—2,5 мес. С помощью целлоидиновой заливки можно получить гистотопографические срезы толщиной около 20 мкм.

Заливка в целлоидин-парафин

Этот метод рекомендуется для обработки объектов, которые легко сжимаются при парафиновой заливке, например органов кроветворения, мезенхимной ткани, а также органов и тканей, имеющих многослойное строение (трахея, кожа и др.).

Используют также смесь целлоидина с касторовым маслом (1:1), пребывание в которой объектов в течение 1—2 дней улуч­шает их пропитывание. Затем для удаления касторового масла материал промывают в трех порциях хлороформа.

 

Схема заливки в целлоидин материала для гистотопограмм по Меркулову Заливка в целлоидин-парафин Заливка в желатин по Волковой-Елецкому Заливка в желатин Гаскелла-Граффа
Формалин 10—15 % 1—2 н Промывание в проточной воде 24 ч Спирт 70 % 1-2 д Спирт 96 % I 1—2 д Спирт 96 % II 3-4д Спирт 96 % III 5 д Спирт 100 % 2 д Спирт 100 %+эфир (1:1) 4-5 д Целлоидин 2% 2—3н Целлоидин 8% 7—10д Хлороформ (уплотнение блоков) 4—7 д Спирт 70 % хранение Формалин 10% 24ч Промывание в проточной воде 6—12 ч Обезвоживание в спиртах 2—3 д Спирт 100% + эфир (1:1) 3-6 ч Целлоидин 2% 1—2 д Хлороформ 18ч Хлороформ + парафин (1:1)37°С 2—3 ч Парафин I 56°С 1-2 ч Парафин II при 56°С 1 —2 ч Формалин10% 24-48ч Промывание в проточной воде 18—24ч Желатин 12,5 % при 37 °С в закрытой посуде 3-20 ч (в зависимости от величины объекта) Желатин 25 % при 37 °С 3-20 ч Заливка свежим 25 % желатином в формочки Застывание в формочках в холодильнике Формалин 20-25 % (уплотнение блоков) 24 ч Формалин 10 % хранение Формалин 10% 48ч Промывание в водопроводной воде 2—6 ч Желатин 10 % при 37 "С 2-6ч Желатин 20 % при 37 'С 2-6ч Заливка в свежую порцию 10 % желатина при 37 "С Застывание формочек с кусочками в холодильнике Вырезка блоков Уплотнение блоков в 10 % формалине
         

Ошибки.

данные причина Устранение
Крошится парафин Слишком твёрд Медленно охлаждался при заливке Низкая Т окружающей среды Большой угол наклона ножа Подышать на блок Изменить угол наклона ножа Перезалить объект
Ткань отделяется от парафина Заливка проводилась холодным парафином Плохая пропитка материала При проводке остались следы спирта Перезалить блок, предварительно поместив его в промежуточную среду для удаления спирта
Материал плохо режется ткань белесоватого цвета срезы сморщенные, плохо расправляются Недостаточное обезвоживание ткани Блок расплавляют в термостате и пропускают по батарее в обратном порядке до 100% спирта, затем снова заливают по схеме.
Нож «подскакивает», не срезая ткань или на срезах образуются поперечные борозды Переуплотнение или пересушивание материала при фиксации или обезвоживании Резать материал, поместив на него кусочек льда Взять из архива новый и провести по схеме
Срезы сморщенные, прилипают к поверхности ножа, закручиваются Недостаточный угол наклона ножа Высокая температура в помещении Материал залит в легкоплавный парафин Изменить угол наклона ножа Перед срезами материал поместить в холодильник Перезалить в более тугоплавкий парафин
Срезы покрыты полосами и легко раскрываются Плохое качество ножа: зазубрины Загрязнение парафина: плотные соринки Наличие в ткани солей кальция Сменить или передвинуть нож Декальцинировать Использовать специаль-ные ножи(для керамики, синтетики, плотных тканей)
Срез прилипает к ножу электризация Подышать на блок

 

 






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных