Главная
Популярная публикация
Научная публикация
Случайная публикация
Обратная связь
ТОР 5 статей:
Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия
Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века
Ценовые и неценовые факторы
Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка
Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы
КАТЕГОРИИ:
|
Заливка ткани в целлоидин
Целлоидин — хорошо растворяющаяся в эфире нитроклетчатка. В гистологической практике применяют 2 %, 4 % и 8 % растворы целлоидина, которые готовят из целлоидиновых пластин или отмытой от эмульсии и высушенной рентгеновской пленки.
Для приготовления 500 мл 2 % раствора целлоидина 10 г сухого целлоидина заливают 250 мл 100 % спирта и оставляют на 1 сут, затем добавляют 250 мл безводного эфира, который растворяет набухший в спирте целлоидин. Для приготовления 4 % и 8 % растворов количество целлоидина увеличивают соответственно в 2 и 4 раза. Растворы хранят в плотно закрытой посуде.
Заливка ткани в целлоидин стала в настоящее время менее популярной, чем парафиновая, и ее применяют главным образом для обработки труднорежущихся тканей и объектов больших размеров, с которых трудно получить хорошие парафиновые срезы. Целлоидиновую заливку используют также в тех случаях, когда необходимо избежать воздействия на исследуемый материал высоких температур. Кроме того, заливка материалов в целлоидин позволяет получить лучшие результаты при наличии в объектахбольших полостей, лакун и слоев различной консистенции.
Эфир и сухой целлоидин огнеопасны, поэтому при работе с ними необходима осторожность.
Обезвоженный материал помещают в смесь 100 % спирта с эфиром (1:1) на 4—6ч, переносят в 2 % раствор целлоидина на 2—3 дня, затем в 4 % и 8 % растворы на 5—7 дней в каждый. Пропитанный кусочек заливают свежим 8 % целлоидином и уплотняют в парах хлороформа (в эксикаторе). Уплотненный таким образом материал заливают 70 % спиртом для хранения. Вырезанные блоки наклеивают густым целлоидином на деревянные колодки на 1 суток перед резкой.
| Заливка в целлоидин по
Меркулову
| Заливка в целлоидин по Ромейсу
| Фиксация:
| Формалин10% 24 ч
Жидкость Карнуа 2 – 4 ч
Спирт 96 % 12 ч
Промывание в воде после формалина 24—48 ч
|
| Обезвоживание:
| Спирт 96 % 24 ч
Спирт 100% 24 ч
| Спирт-эфир(1:1) 4 – 6 ч
Целлоидин 2% 2 д
Целлоидин 4% 2 д
Целлоидин 8% 8 д
Целлоидин 16% уплотнение в фиксаторе до образования поверхностной корочки в парах хлороформа.
Спирт 70% хранение
| Заливка в целлоидин
| Спирт 100 % +эфир(1:1) 6 –24ч
Целлоидин 2 % 2 - 4 дня
Целлоидин 4 % 2 – 4 д
Целлоидин 8— 10% 1 – 2 д
Хлороформ 2 – 3 д
Спирт 70 % хранение
| Особенности заливки в целлоидин крупных объектов
Целлоидиновая заливка, так же как и заливка в парафин, позволяет получать гистотопографические срезы. Пластины ткани органа толщиной 1 см кладут между двумя проволочными сетками (как для заливки в парафин), фиксируют, промывают и обезвоживают. Общая продолжительность процесса заливки в целлоидин крупных объектов 2—2,5 мес. С помощью целлоидиновой заливки можно получить гистотопографические срезы толщиной около 20 мкм.
Заливка в целлоидин-парафин
Этот метод рекомендуется для обработки объектов, которые легко сжимаются при парафиновой заливке, например органов кроветворения, мезенхимной ткани, а также органов и тканей, имеющих многослойное строение (трахея, кожа и др.).
Используют также смесь целлоидина с касторовым маслом (1:1), пребывание в которой объектов в течение 1—2 дней улучшает их пропитывание. Затем для удаления касторового масла материал промывают в трех порциях хлороформа.
Схема заливки в целлоидин материала для гистотопограмм по Меркулову
| Заливка в целлоидин-парафин
| Заливка в желатин по Волковой-Елецкому
| Заливка в желатин Гаскелла-Граффа
| Формалин 10—15 % 1—2 н
Промывание в проточной воде
24 ч
Спирт 70 %
1-2 д
Спирт 96 % I
1—2 д
Спирт 96 % II
3-4д
Спирт 96 % III
5 д
Спирт 100 %
2 д
Спирт 100 %+эфир (1:1)
4-5 д
Целлоидин 2%
2—3н
Целлоидин 8%
7—10д
Хлороформ (уплотнение блоков)
4—7 д
Спирт 70 % хранение
| Формалин 10%
24ч
Промывание в проточной воде
6—12 ч
Обезвоживание в спиртах 2—3 д
Спирт 100% + эфир (1:1)
3-6 ч
Целлоидин 2%
1—2 д
Хлороформ 18ч
Хлороформ + парафин (1:1)37°С
2—3 ч
Парафин I 56°С
1-2 ч
Парафин II при 56°С 1 —2 ч
| Формалин10%
24-48ч
Промывание в проточной воде
18—24ч
Желатин 12,5 % при 37 °С в закрытой посуде 3-20 ч (в зависимости от величины объекта)
Желатин 25 % при 37 °С 3-20 ч
Заливка свежим 25 % желатином в формочки
Застывание в формочках в холодильнике
Формалин 20-25
% (уплотнение блоков) 24 ч
Формалин 10 % хранение
| Формалин 10%
48ч
Промывание в водопроводной воде 2—6 ч
Желатин 10 % при 37 "С 2-6ч
Желатин 20 % при 37 'С 2-6ч
Заливка в свежую порцию 10 % желатина при 37 "С
Застывание формочек с кусочками в холодильнике
Вырезка блоков
Уплотнение блоков в 10 % формалине
| | | | | |
Ошибки.
данные
| причина
| Устранение
| Крошится парафин
| Слишком твёрд
Медленно охлаждался при заливке
Низкая Т окружающей среды
Большой угол наклона ножа
| Подышать на блок
Изменить угол наклона ножа
Перезалить объект
| Ткань отделяется от парафина
| Заливка проводилась холодным парафином
Плохая пропитка материала
При проводке остались следы спирта
| Перезалить блок, предварительно поместив его в промежуточную среду для удаления спирта
| Материал плохо режется
ткань белесоватого цвета
срезы сморщенные, плохо расправляются
| Недостаточное обезвоживание ткани
| Блок расплавляют в термостате и пропускают по батарее в обратном порядке до 100% спирта, затем снова заливают по схеме.
| Нож «подскакивает», не срезая ткань или на срезах образуются поперечные борозды
| Переуплотнение или пересушивание материала при фиксации или обезвоживании
| Резать материал, поместив на него кусочек льда
Взять из архива новый и провести по схеме
| Срезы сморщенные, прилипают к поверхности ножа, закручиваются
| Недостаточный угол наклона ножа
Высокая температура в помещении
Материал залит в легкоплавный парафин
| Изменить угол наклона ножа
Перед срезами материал поместить в холодильник
Перезалить в более тугоплавкий парафин
| Срезы покрыты полосами и легко раскрываются
| Плохое качество ножа: зазубрины
Загрязнение парафина: плотные соринки
Наличие в ткани солей кальция
| Сменить или передвинуть нож
Декальцинировать
Использовать специаль-ные ножи(для керамики, синтетики, плотных тканей)
| Срез прилипает к ножу
| электризация
| Подышать на блок
|
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:
|