Лабораторная диагностика.

Цель диагностики: выделение и идентификация патогенных кокков.

Материал для исследования: гной, кровь, моча, мокрота, отделяемое слизистых оболочек, снинномозговая жидкость, плевральный пунктат; рвотные массы, промывные воды желудка (пищевые отравления).

Методы исследования:

Микроскопический – из исследуемого материала готовят мазок, окрашивают по Граму, рассматривают под микроскопом.

Биологический – заражение подопытных животных, морских свинок, кроликов.

Серологический – выявление антител в сыворотке больного в РСК, РПГА, ИФА реакция флюоресценции. В основном используется для диагностики гонореи (РСК) и менингококковых инфекций (РП и РНГА)

Бактериологический – выделение чистой культуры и изучение её свойств

1 этап – исследуемый материал засевают на питательные среды с целью получения изолированных колоний

2 этап – подозрительные в отношении возбудителя колонии пересевают на скошенный агар

3 этап – идентификация выделенной культуры по свойствам.

Видовую принадлежность патогенных кокков устанавливают по морфолого-культуральным и биохимическим свойствам. Нередко прибегают к исследованию вирулентности и токсигенности. Высоко вирулентными для белых мышей являются стафилококки, стрептококки и особенно пневмококки, вызывающие сепсис. При внутрикожном введении кролику взвеси стафилококков или стрептококков возникает местная воспалительная реакция, часто с некрозом (дермонекротическая проба).

Вирулентность стафилококка определяется также по наличию гемолизинов и α-токсина, плазмокоагулазы и других ферментов агрессии.

К менингококку и гонококку экспериментальные животные невосприимчивы.

Выделенную культуру патогенных кокков необходимо исследовать на чувствительность к ряду антибиотиков. Особенно важно получить антибиотикограмму для стафилококков, среди которых часто встречаются штаммы не только с высокой антибиотикоустойчивостью, но и с полирезистентностью к различным сульфаниламидам.

Фаготипировать можно только стафилококки. Для этого применяется типовой набор умеренных стафилококковых фагов.

Особенности диагностики гонореи и бленнореи. Материалами исследования при гонорее являются от­деляемое уретры, влагалища, шейки матки, предстатель­ной железы, сперма и моча, а при бленнорее - отделяемое конъюнктивы глаза.

Гной из уретры получают ват­ным тампоном, смоченным стерильным изотоническим раствором натрия хлорида. Отделяемое конъюнк­тивы глаз при бленнорее снимают ватным тампоном.

Мазки окрашивают щелочным раствором метиленового синего и по Граму. В гнойном содержимом мазка гоно­кокки располагаются в нейтрофилах в виде бобовидных диплококков, количество которых может достигать мно­гих десятков особей.

В связи с тем, что в исследуемом материале находится посторонняя микрофлора по морфологии сходная с гоно­кокками, применяют прямую и непрямую РИФ.

Бактериологическое исследование проводят в тех случа­ях, когда гонококки в мазках не обнаруживают или нахо­дят нетипичные по размерам и форме особи в виде шаров и «пылинок», неодинаково красящихся по Граму (формы Аша). Ввиду быстрого отмирания гонококков вне организ­ма больных содержащий его материал транспортировке не подлежит. Засевать его на среду желательно сразу же после взятия и не раньше 1-2 дней после прекращения лечения больных, так как терапия антибиотиками резко снижает его жизнеспособность. Обычно используется агаризованная среда, содержащая гидролизат казеина или дрожжевой аутолизат и нативную сыворотку крупного рогатого скота. Для подавления банальной микрофлоры к средам добавляют ристомицин и полимиксин М

Для выделения чистой культу­ры и определения антибиотикочувствительности колонии гонококка пересевают на скошенный сывороточный агар.

При хронической гонорее, когда прекращается гноевыделение, ставят РСК, РИГА с сывороткой крови больного. В качестве антигена используют гонококковую вакцину или диагностикум, приготовленный из убитых гонококков.

Особенности диагностики менингококковых инфекций. Исследованию подлежат налет с задних дужек миндалин, спинномозговая жидкость и кровь больных.

Основным методом диагностики менингококковых инфекций является обнаружение в ликворе и слизи носоглотки бобовидных диплококков в цитоплазме лейкоцитов. Мазки из носоглотки и спинномозговой жидкости окрашивают водным раствором основного фуксина и метиленовым синим, реже - по Граму.

Менингококки, как и гонококки, весьма чувствительны к колебаниям температуры, поэтому пересылаемые в лабораторию материалы заворачивают в вату с грелкой. Ликвор, полученный интралюмбальной пункцией, больных заливают сывороточным агаром или агаром с дефибринированной кровью лошади, быка или барана; слизь из носоглотки засевают на поверхность этих же сред; кровь, полученную венепункцией, в соотношении 1:10, засевают в сывороточный или асцитический бульон. Для изучения агглютинабельности и антибиотикочувствительности культуры ее засевают на скошенный сывороточный агар.

РП применяется в целях определения серовара выделенной культуры для установления источника инфекции. Для обнаружения антител в крови больных ставят РНГА, ИФА и РИА с использованием группоспецифических полисахаридных диагностикумов.

Особенности диагностики стафилококковых инфекций. При заболеваниях, вызванных стафилококками, исследуют гной, отделяемое слизистых оболочек, кровь, мокроту и мочу, рвотные массы, испражнения больных. Из открытых поражений гной берут ватным тампоном, из закрытых гнойников - шприцем, кровь - венепункцией.

Жидкие материалы, исключая кровь, микроскопируют, окрашивая мазки по Граму. При выделении чистой культуры стафилококка материалы высевают в чашки Петри с 3-5 % -ным кровяным агаром. Широко используют молочно-солевой или желточно-солевой агар.

Для дальнейшего исследования колонии стафилококков пересевают на скошенный агар, а получив на третий день чистую культуру, исследуют плазмокоагуляционную активность. Одновременно 2-миллиардную взвесь культуры в объеме 0,2 мл вводят внутрикожно кро­лику светлой масти - на следующие сутки на месте ее вве­дения возникает некроз кожи.

Для окончательной идентификации стафилококков применяют фаготипирование и серотипирование. Опреде­ление чувствительности выделенных стафилококков к ан­тибиотикам является обязательным.

Для выделения гемокультуры стафилококков 5-10 мл крови высевают в сахарный бульон, выдержи­вают в течение 18-24 ч в термостате при 37 °С. На вторые сутки из бульонной культуры готовят мазки, затем дела­ют пересев ее в чашку Петри с кровяным агаром для выяв­ления гемолитической активности и на скошенный МПА. Полученную агаровую гемокультуру изучают так же, как и любую другую, выделенную из гноя.

При пищевых токсикоинфекциях рвотные массы и кал сеют в две чашки с МПА, а для обогащения бактериями - в бульон с 1 % глюкозы и на кровяной агар с 6-7 % пова­ренной соли, где ингибируется рост кишечных, споронос­ных бактерий и протея.

Для обнаружения патогенных стафилококков в опера­ционных, перевязочных, родильных палатах воздух боль­ничных помещений засевают на желточно-солевой агар.

Определение стафилококкового антитоксина в сыво­ротке крови производится при диагностике хронических стафилококковых инфекций (остеомиелит, септикопиемия). В основе реакции лежит нейтрализация стафило­коккового гемотоксина антитоксином сыворотки больно­го.

У здоровых людей титр стафилококкового антитоксина невысок, у больных с хроническими стафилококковыми инфекциями - превышает титр здоровых в несколько раз.

Особенности диагностики стрептококковых инфекций. Для исследования берут гной, отделяемое слизистых обо­лочек, мочу, фекалии, кровь, спинномозговую жидкость.

В мазках, окрашенных по Граму, стрептококки распо­лагаются короткими цепочками, часто по­парно, поодиночно или небольшими группами, вследствие чего их трудно дифференцировать от стафилококков.

Для выделения чистой культуры материалы высевают на сахарный и кровяной агар

Для дифференциации стрептококков группы А применяют тест чувствительности к бацитрацину, к которому β-гемолитические стрептококки обычно высоко резистентны.

При посевах фекалий, пузырной желчи, мочи, смывов с бытовых предметов могут выделяться энтерококки

Гемокультуру при сепсисе получают, засевая 5-10 мл крови в соотношениях 1:10 на сахарный бульон. Для выявления гемотоксина культуру из бульона пересевают в чашку Петри с кровяным агаром.

Для определения вирулентности стрептококка исследуют токсинообразование, в частности продукцию фибринолизина (стрептокиназы).

Серологическое обследование больных при стрептококковых инфекциях проводят при помощи РСК на холоде.

При исследовании мокроты больных пневмонией, гнойных выделений из среднего уха и гайморовой полос­ти, спинномозговой жидкости и крови при менингитах и сепсисе следует иметь в виду возможность выделения S. pneumoniae.

Посев мокроты, гноя обычно положительного резуль­тата не дает, так как наличие в них большого количества сапрофитов и гнилостных бактерий подавляет рост стреп­тококков пневмонии.

В таких случаях комочки мокроты эмульгируют в изо­тоническом растворе натрия хлорида и полученной взвесью внутрибрюшинно заражают белых мышей. Жи­вотные погибают через 18-72 ч от септицемии. Чистую культуру пневмококка выделяют посевом капельки крови из сердца, эмульсии внутренних органов и перитониальной жидкости в чашку Петри с кровяным агаром и в про­бирку с сывороточным бульоном.

Материал подготовила Е.Н. Алексеева

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: