Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Метки Радиоактивные метки




Наиболее широко в качестве радиоактивных меток для иммунного анализа используют 1251 и 3Н.

Обычно в качестве метки выбирают 1251, 7-излучатель, или 3Н (тритий), /^-излучатель, хотя используют также 57Со (для витамина Bi2) и 14С. Тритий дает меньшую чувствительность, чем 1251, поскольку испускаемые /3-частицы слабы тах = 18,6кэВ; Еср = 5,5кэВ) и легко поглощаются стенками сосуда. 7-Лучи, испускаемые 125I (E =28-35 кэВ), не поглощаются сосудом, а эффективность счета при использовании сцинтилляционного счетчика обычно составляет около 80%.

В некоторых случаях метку можно присоединить путем простого изотопного замещения; в большинстве потенциальных определяемых веществ водород можно заместить на тритий, но природные определяемые вещества, содержащие иод (например, тироксин Т4), встречаются значительно реже. Следовательно, чтобы использовать в качестве метки 1251, обычно бывает необходимо присоединить его как «ярлык».

Белки

Простейший способ маркирования белков заключается в прямом замещении в ароматическом кольце тирозина или гистидина. Однако распад радиоактивного нуклида передает молекуле энергию, которая превышает энергию химических связей, и, следовательно, существует опасность разрыва соседних связей и нарушения молекулярной структуры. Таким образом, хотя высокий уровень замещения дает более высокую чувствительность, практически уровень замещения составляет порядка одного атома 1251 на молекулу белка, поскольку более высокий уровень замещения приводит к радиолизу, дезактивирующему белок.

 

Схема 7.9-1. Методы маркирования изотопом 12SI. a — внедрение иода с помощью хлорамина-Т в качестве окислителя; б — внедрение иода с лактопероксида-зой (LPO) и пероксидом водорода в качестве окислителя; е —синтез конъюгата метилового эфира тирозина: Ce-кетогруппа 6-кето-17/3-эстрадиола; г —конъюгаци-онное маркирование, при котором К-гидроксисукцинимидил-3-(4-гидрокси-5-{125!}-иодфенил)пропионат реагирует со свободными аминогруппами.

Предложен ряд методов такого иодирования, но основные успехи в радиоиммунном анализе (РИА) получены Гинвудом и Хантером (1961; схема 7.9-1,а) при разработке метода окисления хлорамином-Т. Однако этот неспецифический окислитель подходит не для любого приложения, и растущую популярность получил ферментативный метод, использующий лактопероксидазу и пероксид водорода (Марчелонис, 1969; схема 7.9-1,5).






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных