Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Флуоресцентные и хемилюминесцентные метки




Флуоресцентные метки обычно дают лучшую чувствительность, чем колориметрические, потому что длины волн возбуждения и детектирования различны.

Принципы работы с этими оптическими метками во многом те же, что и с радиоактивными метками, за исключением того, что метод детектирования включает спектрофотометрическое измерение. Однако большинство прямых методов с колориметрической меткой, когда длины волн возбуждения и детектирования совпадают, редко достигают высокой чувствительности в иммунном анализе. Но можно получить улучшение на порядок величины, разделив эти длины волн. Существует два основных класса меток, пригодных для этого; флуорофоры и хемилюминесцентные реагенты.

Флуорофоры переходят на более высокий энергетический уровень при поглощении света в одном диапазоне длин волн; в возбужденном состоянии происходит быстрый безызлучательный переход в самое низкое возбужденное состояние и затем возврат в основное состояние с испусканием фотона с большей длиной волны (рис. 7.9-10,а, б); возбужденное состояние имеет типичное вре-

Рис. 7.9-10. Последовательность этапов, приводящая к флуоресценции.

 

Рис. 7.9-11. Изменение интенсивности люминесценции во времени, показаны различные «окна» обработки сигнала.

частицам и возвращаясь в основное состояние. Такой процесс тушения может приводить к значительной потере сигнала. Кинетика тушения флуоресценции может быть описана конкуренцией двух параллельных процессов:

Флуоресценция:

Тушение:

и уменьшает выход флуоресценции в соответствии с соотношением

что приводит к потере флуоресценции в соответствии с выражением

где —начальная интенсивность флуоресценции, а —конечная интенсивность после тушения.

Вслед за началом возбуждения интенсивность флуоресценции зависит от концентрации флуорофора в возбужденном состоянии и является функцией времени:

 

мя жизни < 10 8 с. Разница между двумя длинами волн известна как стоксов сдвиг, и чем больше сдвиг, тем проще становится отличать интенсивность испускаемой длины волны от интенсивности фона падающей длины волны. Когда квантовый выход (доля переизлученной энергии) высок, т. е. приближается к 1, метка будет наиболее чувствительной.

В течение времени жизни возбужденного состояния молекула может также участвовать в химической реакции, передавая, таким образом, энергию другим

где Ф —квантовый выход. Если возбуждение происходит в режиме короткого импульса, то профиль интенсивности будет иметь форму, показанную на рис. 7.9-11, где за начальным ростом интенсивности после облучения следует затухание по мере завершения возбуждения. Этот профиль открывает несколько различных возможностей для измерения. Если изобразить зависимость интенсивности флуоресценции различных молекул от времени на одном графике, каждая из флуоресцирующих молекул показывает разный результат для указанных параметров, поскольку времена затухания и квантовые выходы индивидуальны для каждого отдельного флуорофора.

«Идеальные» флуоресцентные метки должны иметь большой стоксов сдвиг и возбуждаться с помощью недорогих источников света.

Наиболее распространенные флуорофоры, используемые напрямую в качестве меток, традиционно являются производными флуоресцеина и родамина; в первом случае при присоединении метки в качестве активного интермеди-ата часто используют изотиоцианатное производное. Длины волн возбуждения/испускания этих меток хорошо подходят для большинства флуориметров (рис. 7.9-12), хотя их положение и малый стоксов сдвиг делают затруднительным нахождение недорогих диодных источников возбуждения, которые можно было бы использовать для создания небольшого специализированного прибора.

Непрерывно разрабатываются новые флуоресцентные зонды, чтобы покрыть все более широкий спектр и приспособиться к потребностям специфических длин волн. В табл. 7.9-3 суммированы некоторые из них. Весьма чувствительными флуорофорами являются гидроксильные производные кумарина (умбеллифероны), которые открывают широкие возможности для получения различных флуоресцентных свойств. Многие из производных этого ароматического фенола, такие, как фосфаты, гликозиды и др., не флуоресцируют, но флуоресцирующие частицы могут быть получены при их гидролизе; это свойство также можно использовать в иммунном анализе с меткой, как уже обсуждалось ранее.

Рис. 7.9-12.Спектры возбуждения и флуоресценции белка, меченного изотиоциана-том флуоресцеина.

Пределы обнаружения для этих флуоресцентных реагентов определяются мешающим влиянием фона и квантовой эффективностью. В первом случае собственная флуоресценция пробы, особенно если она содержит, например, сывороточные белки, NADH или билирубин, может быть очень высока. Свободный NADH, например, проявляет максимум поглощения при 340 нм и

Таблица 7.9-3. Флуоресцентные свойства некоторых флуоресцентных меток, использ мых в иммунном анализе

 

Флуорофор "еозб> НМ ^флуор) КА* Время затухания, НС Молярное поглощение, л/моль Квантовъ выход
Флуоресцеин     4,5   0,85
Родамин С изотиоцианат     3,0   0,7
Лиссамин сульфоро-          
дамин С хлорид 530; 565   1,0    
Анилинонафталин-          
сульфокислота         0,8
2-Метокси-2,4-дифенил-          
3(2Н)фуранон         0,1
Метилумбеллиферон          
Дансил хлорид   480-520     0,3
Люцифер желтый     3,3   0,2
Эритрозин         0,01
Ru-(dipy)3     250-500   0,028
Pd-Копропорфирин         0,17
Пирены          
Техас красный         0,3
Эозин          
Флуорескамин     7,0   0,1
Хлорофилл 430-453 648-669      

сильную флуоресценцию при 400 нм, которые меняют величину и положение при связывании с белком и/или подложкой. Эти мешающие соединения имеют относительно малые времена затухания, так что метод, пригодный для разделения сигналов метки и фона, должен использовать измерение флуоресценции с временным разрешением (см. рис. 7.9-11).

Для этой цели оказались полезными некоторые комплексы лантаноидов с определенными органическими лигандами, такие, как хелаты европия со сток-совым сдвигом более 200 нм и временами затухания свыше 500нс, в частности, потому, что возможный квантовый выход составляет 30-100%. Эти хелаты использовали разными способами; например, нефлуоресцирующие лиганды, образующие комплексы с европием, можно использовать как метку, а флуоресценция, возникающая при добавлении европия, возникает по окончании имму-нокомплексообразующей стадии анализа. Ион Еи3+ в растворе гидратирован восемью или девятью молекулами воды. В этом состоянии он проявляет только слабую флуоресценцию, но удаление этих молекул воды при комплексообразо-вании с органическими лигандами усиливает флуоресценцию Еи3+. В течение времени жизни возбужденного состояния молекула может также принимать участие в химической реакции, передавая, таким образом, энергию другим частицам и возвращаясь в основное состояние. Такой процесс тушения вызывает значительные потери сигнала.

Этот эффект тушения может также найти полезное применение в флуоресцентном иммунном анализе с передачей возбуждения. В принципе, не тре-


буется разделения связанной и свободной фаз. Тушитель представляет собой акцепторную молекулу, например, на антителе (рис. 7.9-13), с максимумом возбуждения, близким к длине волны испускания исходного «донорного» флу-орофора, который находится на антигене. Скорость передачи обратно пропорциональна шестой степени расстояния между молекулами и зависит также от квантового выхода и «соответствия» между длинами волн донора и акцептора.

где Ф, и Ф0 — квантовые выходы донора в присутствии и в отсутствие акцептора, a hq — расстояние, на котором эффективность передачи составляет 50%.

Постоянно используемой парой акцептор—донор являются флуоресцеин и родамин, а получаемое 50%-ное уменьшение флуоресценции донора на ~ 50 Асравнимо с типичным внутримолекулярным расстоянием между рецепторами в IgG (порядка 100 А). Чтобы добиться максимальной близости между донором и акцептором, маркирование антитела следует проводить близко к месту связывания; однако такая направленная модификация антитела меткой затруднительна из-за недостатка уникальных групп в структуре белка. Следовательно, вводят несколько флуорофоров в случайном порядке, но слишком высокий уровень маркирования может привести к нерастворимости, поэтому типичным значением является 10-12 флуорофоров на одну молекулу IgG. Похожие рассуждения применяют и для донора, но в случае гаптена это соотношение может быть ограничено конъюгатом 1:1, а для белка высокая загрузка флуорофора приводит к уменьшению квантовой эффективности из-за самотушения. В принципе, регистрация испускания акцептора должна давать лучший сигнал, но поскольку некоторое прямое возбуждение акцептора может происходить и при длине волны возбуждения донора, это приводит к высокому фону. Выбором, следовательно, является контроль тушения флуоресценции донора.

Для того чтобы отличить сигнал от фона, а в некоторых случаях разделить сигналы связанного и несвязанного меченого антигена, можно использовать и другие молекулярные свойства. Например, когда антиген мал, меченный флуоресцеином аналог способен вращаться с высокой скоростью, а комплекс с антителом имеет значительно меньшую скорость вращения. При возбуждении популяции флуоресцентных молекул линейно поляризованным светом, вероятность возбуждения любой отдельной молекулы определяется ее ориентацией. Если «заморозить» молекулу в определенном положении, так что вращения не происходит, то в результате наблюдают флуоресценцию в плоскостях поперечного электрического (ТЕ, _L) и поперечного магнитного (ТМ, ||) полей по отдельности, а максимальное значение поляризации Р равно 0,5:

Усиление броуновского движения приводит к уменьшению поляризации. Этот принцип используют во флуоресцентной поляризации, поскольку вращение меченого флуоресцирующего антигена уменьшается при связывании с антителом (рис. 7.9-14). Таким образом, при низкой концентрации антигена в

Рис. 7.Р-13. Иммунный анализ путем передачи возбуждения флуоресценции.

Рис. 7.9-14. Принцип иммунного анализа по поляризации флуоресценции. Связывание антитела с антигеном, меченым флуорофором, увеличивает поляризацию флуоресценции.

пробе поляризация флуоресценции максимальна, поскольку максимальное количество меченого -антигена связано.

Для данного флуорофора изменение поляризации флуоресценции зависит от молекулярной массы антигена и природы комплекса с антителом; должно иметь место надлежащее изменение молекулярной массы, а этого нельзя добиться с большими антигенами. В целом, принято считать, что иммунный анализ по поляризации флуоресценции неприменим к антигенам с молекулярной массой выше 20000.

Основной проблемой гомогенного анализа, описанного выше, является влияние мешающих веществ, что не дает возможности реализовать теоретическую чувствительность. В табл. 7.9-4 проведено сравнение некоторых пределов обнаружения, полученных для отдельных вариантов с использованием флуоресцентной метки.

 

Таблица 7.9-4. Пределы обнаружения некоторых гаптенов, определяемых в различных вариантах иммунного анализа
Вариант метода Определяемое вещество Предел обнаружения, моль/л
Субстратная метка Тушение Передача возбуждения Поляризация Теофиллин Гентамицин Кодеин Морфин Гентамицин Фенитоин 3 • 1СГ8 2 • 1(Г6 1,5- 10~9 1,5 -ID"10 4, 5 -Ю-6 3,5- 1(Г6  

П Хемилюминесцентные метки испускают свет за счет неустойчивого люминес-цирующего продукта реакции.

В отличие от флуорофоров, хемилюминесцентные реагенты не требуют для возбуждения падающего света, а испускают свет в результате химической реакции. Например, арилакридиновые эфиры, присоединенные к рецепторной молекуле через эфирную часть, могут разорвать эфирную связь за счет щелочного гидролиза на одной из стадий анализа с образованием неустойчивого люминесцирующего N-метилакридона, который разлагается с испусканием света (схема 7.9-2). Максимальная интенсивность для таких меток наблюдается обычно в течение 0,4с с периодом полузатухания 0,9с.

Схема 7.9-2.Хемилюминесцентная реакция с арилакридиновым эфиром.

Схема 7.9-3. Модифицированная карбодиимидная реакция для конъюгата изолюминола через свободную карбоксильную группу.

Это сравнимо с очень медленным испусканием (~ 25 с после инициирования) производных изолюминола. Люминол и его производные относятся к семейству циклических ацилгидразидов и испускают голубой свет (425 нм) при окислении. Изолюминол имеет более низкий квантовый выход, чем люминол, но в отличие от люминола этот выход мало изменяется при соединении с белками через аминогруппу. Синтезированы производные изолюминола с разнообразными мостиковыми группами для присоединения к гаптенам, многие из них нацелены на пептидную связь, например, за счет реакции с карбодиимидной или сукцинимидной активацией (схема 7.9-3). Как показано в следующем разделе, хемилюминесцентный контроль значительно усовершенствован за счет

 

идентификации ряда соединений, которые увеличивают испускание света при добавлении в реакционную среду.

Ферментные метки

Общий принцип

Ферментные метки непосредственно не участвуют в измерении, но поскольку они вызывают превращение многих субстратных молекул на одну молекулу фермента, существует высокий потенциал усиления.

Ферменты служат, пожалуй, наиболее широко используемыми в иммунном анализе метками, однако они непосредственно не участвуют в измерении, в отличие от изотопов или флуоресцентных меток. Вместо этого, измерение может включать детектирование расхода ферментного субстрата или накопления продукта, требуя, таким образом, наличия в анализе другого реагента и привнося в метод дополнительные сложности. Тем не менее, поскольку одна молекула фермента может вызвать превращение многих молекул субстрата, имеется очень высокий потенциал усиления сигнала, и это преимущество перевешивает часто упоминаемый недостаток несовместимой оптимизации условий конечного этапа ферментативного анализа и связывания антитело—антиген.

Наиболее часто в качестве меток используют два фермента — щелочную фосфатазу (ЩФ) и пероксидазу хрена (ПХ). Выбор зависит от возможности оптического детектирования превращения субстратов этих ферментов и от легкости соединения фермента без потери активности. Щелочная фосфатаза представляет димерный гликопротеин с молекулярной массой 140 000, содержащий много свободных аминокислот для соединения. Аналогично пероксидаза хрена содержит четыре лизиновых остатка для соединения и имеет молекулярную массу 44000. В некоторых случаях для соединения можно использовать углеводные остатки.

Разработаны методы соединения фермента с антителом или антигеном в соответствии с конечным вариантом и специальными требованиями иммунного анализа. Существуют два главных подхода: гомобифункциональные агенты и гетеробифункциональные агенты. Многие из используемых реагентов те же, что и уже рассмотренные при образовании конъюгатов с радиоактивной меткой (см. табл. 7.9-2), и здесь можно применить похожее рассмотрение за исключением того, что в этом случае конъюгат образует связь с белком-меткой. Может оказаться необходимым защитить активное место фермента в процессе соединения за счет включения субстрата фермента в процессе приготовления; это особенно важно, когда происходит соединение фермента с гаптеном, поскольку гаптен может образовать связь или закрыть активное место, маскируя места распознавания и гаптена, и фермента.

Соединение с гаптеном должно, вообще говоря, использовать ту же группу, что и для образования иммуногена в первом случае, так чтобы лиганд не маскировал место распознавания. Например, в большинстве определений гидрокортизона применяют сыворотку, полученную с помощью конъюгата кортизон-3-(0-карбоксиметил)оксима, поскольку это оставляет уникальное 17 положение D-кольца доступным для распознавания, создавая, таким образом, специфичность к кортикостероидной структуре (рис. 7.9-15). Конъюгат же с гаптеном, меченый в положении С-21, не проявляет затем сродства к антителу, так что этот анализ терпит неудачу.

Присоединение ферментной метки не должно блокировать место распознавания!

Точно так же, как может потребоваться разделяющая молекула между гаптеном и белком для образования иммуногена, способность меченого конъюгата к связыванию с антителом можно улучшить, если поместить подходящий разделитель между гаптеном и ферментом. Наиболее популярным гомобифунк-циональным агентом для присоединения фермента является глутаровый альдегид, но он склонен к образованию очень гетерогенных комплексов, с существенным кросс-линкингом фермент-фермент наряду с желаемым фермент-конъюгат. Гетеробифункциональные агенты позволяют обойти эту проблему с различной степенью успеха, зависящей от относительной реакционной способности разных групп. Широко используют N-гидроксисукцинимидный эфир дималеимида и карбодиимиды, но доступны многие другие соединительные агенты (см. также разд. 7.8.2).

Гомогенный ферментативный иммунный анализ

Интересным развитием идеи использовать ферментные метки является контроль соотношения «связанныйхвободный» путем изменения активности фермента в результате связывания в конъюгат с антителом или дополнительного связывания антиферментных антител. Такие способы анализа не нуждаются в этапе разделения, а значит, можно упростить проведение определения. Разработано несколько способов гомогенного ферментативного иммунного анализа (ФИА).

Умножающий ферментативный иммунный анализ (УФИА)

В конкурентном анализе гаптен, меченный ферментом, может конкурировать с гаптеном пробы за ограниченный запас антигаптеновых антител. Если связывание антитела с гаптеновым конъюгатом ингибирует активность фермента, то чем выше концентрация гаптена в пробе, тем меньше связывание антитела с конъюгатом, и, следовательно, тем меньше ингибирование (рис. 7.9-16). В первом варианте метода УФИА разработанном для морфина, в качестве фермента, чувствительного к ингибированию, использовали лизоцим, но было найдено, что глюкозо-6-фосфат — дегидрогеназа является наиболее эффективной для этого метода в отношении изменения ферментативной активности. При-

Рис. 7.9-15. Гидрокортизон, иллюстрирующий общую структуру стероидов, с уникальным центром «распознавания» для гидрокортизона в С-17. Соединение через С-3 не маскирует этот центр.

Рис. 7.9-16.Принцип умножающего ФИА-анализа. Антитело, связанное с ферментом — меткой гаптена, меняет активность фермента.

Рис. 7.9-17. Иммунный анализ с помощью фермента, меченного кофактором. Антитело, связанное с меченым гапте-ном, не принимает участия в ферментативной реакции.

ложения УФИА направлены также на определяемые вещества с низкой молекулярной массой, в особенности из семейства наркотиков и терапевтических агентов. Основным недостатком этого метода является медленное установление равновесия с гаптеном в растворе, так что необходимо предварительное выдерживание пробы и антител перед добавлением ферментного конъюгата. Для определяемых веществ с большей молекулярной массой можно использовать модификации основного принципа.

Меткакофактор фермента

Преимущество использования в качестве метки кофактора фермента, а не самого фермента, заключается в том, что его можно легко включить в схему усиления (рис. 7.9-17) и использовать в системе гомогенного анализа. Применяют конъюгаты гаптен-кофактор (например, NAD-гаптен), и в присутствии соединения фермент-NAD и субстрата конъюгат, связанный с антителом, неактивен, тогда как свободный конъюгат способен участвовать в ферментативном цикле. Каждый раз, когда конъюгат гаптен-кофактор претерпевает цикл уси-

 

Косубстрат Атах (окисленная форма), нм
2,2'-азинобис(этилбензотиазолин-6-сульфонат) (АБТС) о-Фенилендиамин (ОФД) 3,3', 5,5'-Тетраметилбензидин (ТМБ) 415 492 (подкисленная) 450 (подкисленная)

Таблица 7.9-5. Косубстраты пероксидазы для колориметрического детектирования Косубстрат Атах (окисленная форма), нм

2,2'-азинобис(этилбензотиазолин-6-сульфонат) (АБТС) 415

о-Фенилендиамин (ОФД) 492 (подкисленная)

3,3', 5,5'-Тетраметилбензидин (ТМВ)__________ 450 (подкисленная)__

ления, образуется стехиометрическое количество продукта, и количество продукта накапливается по мере протекания анализа.

Образование сигнала

Образование колориметрического сигнала

D Для проведения колориметрического иммунного анализа с ферментной меткой ферментативная реакция должна приводить к образованию окрашенного продукта.

Принципиальная идея здесь заключается в том, что ферментный субстрат следует превратить в окрашенный продукт. В случае щелочной фосфатазы обычно используют n-нитрофенилфосфат или аналогичный ароматический фосфат:

но показано, что пероксидаза хрена проявляет большую чувствительность. В последнем случае метка действует как косубстрат с пероксидом и донором водорода. Конечным продуктом является окисленный донор водорода, который выбирают в соответствии с его способностью поглощать в видимой области. В табл. 7.9-5 приведены распространенные косубстраты пероксидазы, имеющие подходящие абсорбционные характеристики в окисленном виде. 3,3', 5,5'-Тетраметилбензидин (ТМБ) дает наибольшее поглощение и наиболее низкий фон в сравнении с многими другими используемыми субстратами, такими, как 2,2'-азинобис(этилбензотиазолин-6-сульфонат) (АБТС) или о- фенилендиамин.

Образование флуориметрического сигнала

Щелочная фосфатаза (ЩФ) больше подходит для флуоресцентных измерений, чем пероксидаза хрена (ПХ). Наиболее часто применяемым субстратом служит 4-метилумбеллиферилфосфат, который испускает свет при 448 нм при возбуждении на длине волны 365 нм. Следовательно, преимуществом ЩФ является то, что флуоресцирующее соединение можно фосфорилировать, создав, таким образом, флуорофорный субстрат для довольно неспецифичного фермента ЩФ. В принципе, можно синтезировать широкий класс флуорофоров с различными флуоресцентными свойствами и временами затухания в качестве подходящих субстратов для ферментной метки. Такой ферментативный подход

Рис. 7.9-18. Флуоресцентный иммунный анализ с субстратом-меткой. Антитело, связанное с меченым гаптеном, ингибирует его как субстрат для фермента.

к флуоресцентным измерениям имеет очевидное преимущество более сильного сигнала в сравнении с обычной флуорофорной меткой, поскольку каждая ферментная метка создает много флуоресцирующих молекул.

Однако это справедливо не во всех случаях, например, в анализе, основанном на принципе УФИА, где гаптен маркирован субстратом и образует флуорогенный продукт при ферментативном катализе только тогда, когда не образуется комплекса с антителом (рис. 7.9-18). В этом случае конъюгат /3- галактозилумбеллиферона и гаптена может участвовать в качестве меченого аналога определяемого вещества в конкурентном анализе с ограниченным количеством антител. Комплекс антитела с гаптеновым конъюгатом ингибирован как субстрат для фермента /3-галактозидазы, тогда как оставшийся свободным конъюгат гидролизуется ферментом, образуя флуорогенный продукт.

Образование хемилюминесцентного сигнала

D Биолюминесценция предлагает очень чувствительный способ определения ферментной метки.

Щелочная фосфатаза особенно полезна при разработке способов генерации люминесцентного сигнала, поскольку многие ароматические фосфаты при отщеплении фосфатной группы образуют неустойчивый анион, который распадается с испусканием света (например, адамантил-1,2-диоксентанарилфосфат). Однако большинство выполняемых люминесцентных измерений основаны на

Схема 7.9-4. Хемилюминесцентное окисление люмино-ла с помощью пероксидазы хрена.

использовании пероксида. Люминол как косубстрат пероксида окисляется ПХ, образуя неустойчивый промежуточный продукт, который распадается до 3-аминофталата с испусканием света (схема 7.9-4). Хотя хемилюминесцентные реакции могут давать весьма чувствительные измерения, они, тем не менее, обычно имеют квантовый выход менее 20%.

Можно увеличить сигнал от реакции на схеме 7.9-4 на несколько порядков величины, добавляя «усилитель» (рис. 7.9-19). Такими усилителями обычно служат фенолы и нафтолы, хотя показано, что другие молекулы тоже проявляют эффект (табл. 7.9-6). Точный механизм этого усиления до конца не ясен. Однако вероятно, что усилитель действует как переносчик радикала между ферментативными реакциями с пероксидом и люминолом, улучшая, таким образом, «медленный этап» образования люминольных радикалов.

Биолюминесценция также представляет хемилюминесцентный метод, связанный в первую очередь с механизмом, отвечающим за образование света светляками. Он включает фермент люциферазу, которая катализирует окисление гетероциклической органической молекулы (люциферина). Люциферины имеют различную структуру, но многие из реакций, катализируемых люциферазой, включают такие кофакторы, как АТР (АТФ), FMN (флавинмо-нонуклеотид) или NADH, так что использование этих кофакторных меток (см. рис. 7.9-17) вводит цикл в катализируемый люциферазой механизм (схема 7.9-5). С другой стороны, с помощью NAD-ферментной метки получают ферментативное усиление. Например, на рис. 7.9-20 показан ферментативный цикл, инициируемый NAD+, который приводит к люминесцентному сигналу. Такие определения NADH могут давать низкий предел обнаружения на уровне 10~15моль NADH с линейностью свыше пяти порядков величины.

Мешающие влияния

Мешающие влияния — обобщенное название любого фактора, который вызывает смещение результата анализа. Большинство из наблюдаемых эффектов классифицированы как влияние основы, но это не устанавливает действительную природу проблемы. Может быть несколько источников ошибок, каждый из которых может проявляться различным образом.

 

Рис. 7.9-19. Ферментный иммунный анализ с усиленной люминесценцией в конечной точке.

Рис. 7.9-20. Включение ферментной метки в биолюминесцентный процесс.

Схема 7.9-5. АТФ в цикле генерации света люциферазой светляков.

Таблица 7.9-6. Примеры хемилюминесцентных усилителей в реакции окисления люминола, катализируемой пероксидазой хрена

 






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных