Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Лабораторна робота № 8




Поділ і визначення катіонів методом одномірної паперової хроматографії

Мета роботи: навчитися проводити хроматографичні виміри на прикладі паперової хроматографії; на підставі величин Rf проводити ідентифікацію компонентів сумішей.

Хід роботи

 

Дослід 1. Визначення вмісту іонів Ферума в продуктах за допомогою паперової хроматографії.

Підготовка зразків. Чайну ложку гречаної крупи роздрібнити в ступці, прокип'ятити з 10 см 3 дистильованої води та відфільтрувати. Фільтрат випарити до об'єму 2 см 3.

20 см 3 яблучного соку профільтрувати через паперовий фільтр.

Підготовка камери для хроматографії. Поділ сумішей проводять у закритих камерах, тому що необхідно уникати випаровування розчинника зі смужки паперу. В якості камери можна використовувати циліндри із притертою пробкою, до якої за допомогою гачка кріпиться смужка хроматографічного паперу. У два циліндри внести по 10−15 см 3 елюенту (суміш розчинників HCl − ацетон − вода) і щільно закрити пробкою для насичення атмосфери камери парами розчинника. Рівень занурення паперу повинен бути не вище лінії, накресленої на смужці паперу.

Підготовка паперу. Для проведення аналізу методом паперової хроматографії використовують хроматографічний папір, що відрізняється високим ступенем чистоти, однаковими розмірами волокон та рівномірністю їх розташування, або фільтрувальний папір. Папір варто брати акуратно за край, не захоплюючи при цьому його центральну частину!

На фільтрувальному папері розміром 20´3 см за допомогою лінійки накреслити графітовим олівцем лінію старту та лінію фінішу на відстані 2 см від кожного краю паперу.

У градуйовану піпетку об'ємом 1 см 3 без допомоги гумової груші набрати 5 %-вий розчин ферум (III) хлориду в такій кількості, щоб рівень розчину в піпетці не перевищував 5 мм. Після цього перенести цей розчин на лінію старту, для чого необхідно торкнутися піпеткою до паперу. Розчин варто наносити так, щоб крапля не розпливалася (чим менше діаметр краплі, тим більше чіткою буде хроматограма). Діаметр плями не повинен перевищувати 2 мм. На цю ж смужку паперу на відстані 2 см від першої проби, нанести на лінію старту за допомогою другої піпетки пробу яблучного соку. Плями обвести олівцем і висушити на повітрі. Цю операцію провести 2 рази.

Аналогічно на другу смужку паперу нанести краплі 5 %-вого розчину ферум (III) хлориду та екстракту, отриманого із гречаної крупи.

Одержання хроматограм. Смужку підготовленого хроматографічного паперу опустити вертикально в циліндр так, щоб її кінець був занурений у розчинник не більш, ніж на 0,5 см (Рис.8.1). Пляма не повинна поринати в розчинник, а паперова смужка не повинна торкатися стінок циліндра. Процес хроматографування припинити після того, як розчинник пройде від лінії старту не менш 10 см.

 

Рис.8.1 Пристрій для проведення паперової хроматографії

 

Після цього витягти папір, позначити на ньому олівцем положення фронту розчинника й висушити на повітрі.

Виявлення іонів Феруму. Більшість катіонів (у тому числі й Ферум) утворюють невидимі хроматографічні зони, тому для їх виявлення хроматограму обробляють розчинами органічних і неорганічних реагентів-проявників.

Виявлення іонів Феруму проведіть шляхом сприскування паперу з пульверизатора 10 %-вим розчином калій гексаціаноферату (II) K4[Fe(CN)6]. У результаті реакції утворення берлінської лазурі іони Феруму проявляються у вигляді плям синіх кольорів.

Обробка результатів. Визначити кількість Феруму в соці й гречаній крупі, використовуючи величини площі плями «свідка» (5 %-вого розчину Ферум (III) хлориду) і площі плями аналізованого розчину.

Для цього на хроматограмі за допомогою лінійки виміряти відстань, що за час хроматографування пройшли розчинник і катіон відповідно й геометричні розміри плям.

Хроматограму намалювати в лабораторному журналі (або вклеїти в журнал). Отримані результати занести в таблицю 8.1.

 

 

Таблиця 8.1

Результати проведення хроматографічного аналізу продуктів

Продукт ls, см lL, см Rf Sст, мм2 Sх, мм2 Сх, %
Сік яблучний            
Крупу гречана            

 

де ls – відстань від точки старту до центра плями катіону, см;

lL – відстань від точки старту до лінії фронту розчинника, см;

Sст −площа плями стандарту, мм 2;

Sх − площа плями аналізованого розчину, мм 2;

Rf − коефіцієнт розподілу;

С – концентрація Феруму в продукті, %.

 

Значення коефіцієнту розподілу Rf розрахувати за формулою:

.

Концентрацію Феруму в продукті Сх розрахувати за формулою:

, %.

 

Дослід 2. Поділ та ідентифікація амінокислот методом паперової хроматографії.

Підготовка камери для хроматографування. У два циліндри, що використовуються у якості хроматографічних камер, внести по 10−15 см 3 елюента (суміш розчинників ізопропанол – вода) і щільно закрити пробкою для насичення атмосфери камери парами розчинника.

Підготовка паперу. На фільтрувальному папері розміром 20´2 см за допомогою лінійки накреслити графітовим олівцем лінію старту та лінію фінішу на відстані 2 см від кожного краю паперу. Папір варто брати акуратно за край, не захоплюючи при цьому її центральну частину!

Після цього на центр лінії старту нанести піпеткою краплю суміші амінокислот № 1. Пляму обвести олівцем і висушити на повітрі. Цю операцію провести 2 рази.

Аналогічно підготувати другу смужку паперу, на яку таким же способом нанести краплю суміші амінокислот № 2.

Одержання хроматограм. Смужку підготовленого хроматографической паперу опустити вертикально в циліндр так, щоб її кінець був занурений у розчинник не більш, ніж на 0,5 см. Пляма не повинна знаходитися в розчиннику, а паперова смужка не повинна торкатися стінок циліндра. Процес хроматографирования припинити після того, як розчинник пройде від лінії старту 8-10 см.

Після цього витягти папір, відзначити на ній олівцем положення фронту розчинника й висушити над піщаною банею.

Виявлення амінокислот. Для виявлення амінокислот папір сприскувати розчином нингідрину. Нингідрин розщеплює α-амінокислоту до альдегіду, вуглекислого газу та аммоніаку, а аммоніак утворює із нингідрином барвник фіолетових кольорів (фіолетовий Руеманна). Пролин, у якого немає α-аминогрупи, у реакції з нингідрином утворює похідне жовтих кольорів.

Після обробки паперу розчином нингідрину її знову необхідно підсушити при нагріванні при 70-80о С (для прояву плям на хроматограммі досить 3-5 хв).

Обробка результатів. За допомогою лінійки виміряти відстань, що за час хроматографування пройшли розчинник і кожна з амінокислот. Хроматограму замалювати в лабораторному журналі (або вклеїти в журнал). Результати занести в таблицю 8.2.

 

Таблиця 8.2

Результати проведення хроматографічного аналізу сумішей амінокислот

Аналізована система Кількість плям на хроматограмі Кольори плями ls, см lL, см Rf Аміно-кислота
Суміш амінокислот № 1            
         
Суміш амінокислот № 2            
         

 

Розрахувати величини R f для кожної плями. Потім за величиною Rf і забарвленням плям ідентифікувати компоненти аналізованої суміші, використовуючи дані таблиці 8.3.

 

Таблиця 8.3.

Величини R f і забарвлення плям амінокислот на хроматограмі при поділі їх методом паперової хроматографії

Амінокислота R f Кольори плям
Лізин 0,10 Червоно-фіолетовий
Пролин 0,53 Жовто-синій
Гліцин 0,35 Фіолетовий
Лейцин 0,81 Фіолетовий
Валин 0,66 Фіолетовий

Контрольні питання

 

1. Класифікуйте хроматографічні методи аналізу за природою рухливої фази, за механізмом поділу та способом хроматографування. Наведіть приклади використання хроматографічних методів аналізу при визначенні якості харчових продуктів.

2. У чому переваги елюентної хроматографії перед фронтальною та витискової?

3. Що характеризує величина R f у хроматографії і як її визначають? Перелічіть фактори, що впливають на величину R f.

4. Чому варто уникати нанесення більших об'ємів проби при хроматографуванні на папері? Що буде при занадто малому (при занадто великому) часі хроматографування на папері?

5. Як ідентифікують компоненти на паперових хроматограмах?

6. Як проявляють компоненти на паперових хроматограмах?

7. Як визначити кількість компонентів за результатами паперової хроматографії?

 


Лабораторна робота № 10






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных