Коли-индекс, коли-титр-

Занятие 8

№1

Санитарно-показательные микроорганизмы являются постоянными обитателями поверхностей и полостей человеческого или животного организма. Обнаружение их в объектах внешней среды свидетельствует о загрязнение выделениями человека или животного. Чем обильнее такое загрязнение, тем больше возможность попадания в объект патогенных микробов. Санитарно-показательными микроорганизмами могут быть только те, которые постоянно и в больших количествах содержатся в выделениях человека или животного, они должны сохранять жизнеспособность во внешней среде в течение сроков, близких к срокам выживания патогенных микробов, выделяемых теми же путями, но не размножаться интенсивно во внешней среде. Они должны также легко обнаруживаться современными и довольно простыми методами исследования. Основными санитарно-показательными микроорганизмами в отношении кишечных инфекций, указывающими на фекальное загрязнение внешней среды (вода, почва), считают бактерии группы кишечных палочек (БГКП). В качестве дополнительных показателей при оценке некоторых объектов определяют наличие фекальных стрептококков (энтерококков) и клостридий.

Кишечные палочки как санитарно-показательные микробы наиболее полно соответствуют требованиям, предъявляемым к таким микроорганизмам. Они являются постоянными обитателями кишечника человека и теплокровных животных, в больших количествах выделяются в окружающую среду. Сроки их выживания во внешней среде немного превышают сроки сохранения патогенных представителей кишечных бактерий в тех же условиях или совпадают с ними.

К БГКП относятся не только эшерихии, но и представители родов цитробактер, энтеробактер, клебсиеллы. Для них характерны следующие признаки: короткие, грамотрицательные, неспорообразующие палочки, на среде Эндо они растут в виде темно-красных колоний с металлическим блеском или без него либо в виде розовых колоний с темным центром; сбраживают лактозу и глюкозу при 37°С в течение 24 ч с образованием кислоты и газа, не обладают оксидазной активностью. Отрицательная оксидазная проба позволяет дифференцировать семейство Enterobacteriaceae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadaceae и других водных сапрофитов, обладающих ферментом оксидазой.

Все БГКП попадают во внешнюю среду только из кишечника человека и животных. Наибольшее санитарно-показательное значение в этой группе имеет E. coli, присутствие которой, например, в питьевой воде, рассматривается как признак свежего хозяйственно-бытового загрязнения, несомненно, фекального происхождения.
Присутствие энтерококков считают дополнительным показателем фекального загрязнения воды и других объектов. Однако их выделение требует сред более сложных при приготовлении и растут они медленнее. Энтерококки являются нормальными обитателями кишечника, но выделяются во внешнюю среду в меньших количествах, чем кишечные палочки. Энтерококки быстрее отмирают в воде и почве. Как правило, они не размножаются в этих объектах, что позволяет рассматривать их как показатель свежего фекального загрязнения.

К санитарно-показательным клостридиям относят группу грамположительных, спорообразующих анаэробных палочек, редуцирующих сульфит на сульфит-неомицинполимиксиновой среде (СПН) при инкубации в условиях 45°С в течение 12—24 ч. Эта группа в основном представлена CI. perfringens, которые встречаются в кишечнике большинства людей в значительно меньших количествах, чем кишечная палочка. Клостридии более, устойчивы, чем не образующие спор БГКП и энтерококки. Определение санитарно-показательных клостридий рекомендуют проводить в почве и воде, используемой на предприятиях пищевой промышленности, а также при выборе новых источников водоснабжения.

Санитарно-показательными микроорганизмами загрязнения воздуха закрытых помещений являются стафилококки (Staph, aureus), а также зеленящие и гемолитические стрептококки, постоянно обитающие на слизистой оболочке верхних дыхательных путей и выделяющиеся в воздушную среду при разговоре, кашле, чиханье. Во внешней среде стрептококки сохраняют жизнеспособность в течение примерно тех же сроков, что и возбудители дифтерии, а стафилококки — даже дольше. Чем большее количество стрептококков обнаруживают в воздушной среде, тем вероятнее возможность заражения человека воздушно-капельными инфекциями. Нарастание обсемененности воздуха Staph, aureus и частое его обнаружение свидетельствуют о санитарно-эпидемиологическом неблагополучии. В лечебных учреждениях вторичным источником обсеменения воздуха Staph. aureus могут быть загрязненные постельные принадлежности, белье, с которых эти микроорганизмы попадают в воздух, Наиболее полную картину воздушно-капельного загрязнения воздуха дает определение и стрептококков и стафилококков. Однако ввиду того, что стрептококки довольно трудно культивировать, в лабораторной практике ограничиваются выделением Staph. aureus.

Микробное число почвы — это общее количество микроорганизмов, содержащихся в 1 г почвы. Для определения микробного числа берут в асептических условиях пробы почвы, измельчают, растирают и приготавливают несколько десятикратных разведений (1: 100; 1: 1000; 1:10 000; 1:100 000) для последующего посева. Посев можно производить двумя методами: 1) в глубину питательного агара, когда 1 мл соответствующего разведения почвенной суспензии вносят в пустую стерильную чашку Петри и заливают 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С— МПА или сусло-агара; среду перемешивают, осторожно вращая чашку Петри в горизонтальной плоскости. После застывания среды чашки с сусло-агаром помещают в термостат при 24°С (для роста дрожжевой и грибной микрофлоры), чашки с МПА при 37°С (для роста бактериальной флоры);

2) на поверхность питательного агара, когда 0,1 мл соответствующего разведения суспензии распределяют шпателем по поверхности плотной питательной среды (МПА или сусло-агара). Посевы инкубируют 48 ч, после чего подсчитывают количество выросших колоний для каждого разведения почвы, а затем вычисляют средний показатель микробного числа почвы. По микробному числу почвы судят об общей численности в основном сапрофитных микроорганизмов, вырастающих на МПА и сусло-агаре; если же необходимо выделить определенные группы микроорганизмов (например, азотофиксирующие, разлагающие клетчатку, продуцирующие антибиотики, нитрифицирующие, некоторые патогенные и т. д.) используют специальные среды и методы посева.

Коли-индекс, коли-титр-

количественные показатели фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, почвы и других объектов окружающей среды, основанные на исследовании содержания в них кишечной палочки. Она является индикатором фекального загрязнения,т.к. относится к постояннымобитателям кишечника человека, в значительномколичестве выделяется с фекалиями в окружающую среду,где длительно сохраняется. Кроме того, кишечная палочка легко выращивается в обычных условиях на простых питательных средах. Присутствие ее в исследуемых субстратах указывает на возможность наличия в них других, в т.ч. патогенных для человека микроорганизмов кишечной группы, непосредственное обнаружение которых затруднено. Высокое содержание кишечной палочки в тех или иных субстратах может свидетельствовать об интенсивном фекальном загрязнении и повышает эпидемиологическую опасность этих субстратов. Поэтому питьевая вода и различные пищевые продукты подвергаются постоянному санитарно-бактериологическому контролю, предусматривающему определение коли-титра или коли-кидекса.

Коли-индекс — количество кишечных палочек, обнаруживаемое на 1 л жидкости, 1 кг твердого вещества(для пищевых продуктов) и в 1 г почвы. Для определения коли-индекса используют метод мембранных фильтров или непосредственный посев различных количеств исследуемого материала на плотные питательные среды. Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры №2 или №3, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируемые при t° 37°, а затем исследуют выросшие на поверхности фильтра темно-красные с металлическим блеском, розовые и прозрачные колонии. Из колоний каждого типа готовят мазки и окрашивают их по Граму. Колонии разных типов проверяют на оксидазную активность, которая должна быть отрицательной. Бесцветные и розовые колонии дополнительно засевают на полужидкую среду с глюкозой и индикатором, на которой в течение 24-часовой инкубации при t= 37° должны образовываться кислота и газ.Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала.

Коли-титр — наименьшее количество жидкости или твердого вещества (выраженное соответственно в миллилитрах или граммах), в котором обнаруживаются кишечные палочки.

Коли-титр определяют бродильным методом, заключающимся в посеве определенных объемов исследуемого субстрата на среды накопления (глюкозопептонную или лактозопептонную с индикатором и поплавком и другие подобные среды), которые выдерживают t= 37°. Большие объемы засевают на концентрированную среду, малые объемы — в пробирки со средой нормальной концентрации. Из всех помутневших пробирок вне зависимости от образования кислоты и газа делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний.

Ориентировочно за коли-титр принимают тот наименьший объем, при посеве которого на средынакопления выявлены кишечные палочки. Наиболее вероятное значение коли-титра воды, молока, пива идр. определяют с помощью специальных таблиц, сопоставляя с ними полученные результаты. В целом бродильный метод менее точен, чем учет выросших бактерий на плотных средах и мембранных фильтрах.

№2 Почва

Почва является основной средой обитания многих микробов. Отсюда они поступают в воду и обсеменяют воздух. Количество микроорганизмов в почве значительно: от сотен миллионов до миллиардов особей в 1 г почвы. Состав и количество микрофлоры почвы зависят от ее влажности, температуры, от характера и количества питательных веществ в ней, кислотности. Плодородные, возделываемые почвы с большим количеством органических веществ содержат значительно большее число микроорганизмов, чем глинистые почвы и почвы пустынь. Распределение микробов в почве неравномерно. Самый поверхностный слой толщиной 1—2 мм содержит мало микроорганизмов, так как они быстро отмирают под действием солнечных лучей и высыхания. Следующий слой, глубиной 10—20 см, наиболее обсеменен разнообразными микроорганизмами, под влиянием которых в нем протекают бурные биохимические процессы. По мере увеличения глубины количество микробов постепенно уменьшается, но их обнаруживают даже на значительной глубине. Так, найдены жизнеспособные микробы в глубинных отложениях, образовавшихся много миллионов лет назад. Микрофлора почвы чрезвычайно разнообразна. В ней встречается множество видов бактерий: гнилостные, нитрифицирующие, азотфиксирующие, разлагающие клетчатку, серобактерии и др. Среди них могут быть аэробы и анаэробы, спорообразующие и неспорообразующие. В почве содержатся разнообразные грибы, простейшие, водоросли, вирусы.

Значение микрофлоры почвы очень велико. Благодаря жизнедеятельности микробов происходят разложение и минерализация животных и растительных остатков, по-падающих в почву, процесс самоочищения ее от нечистот и отбросов. С помощью микроорганизмов почвы осуществляются биологический круговорот многих минеральных элементов (углерод, азот, фосфор), биологическая фиксация атмосферного азота. Микроорганизмы участвуют также в изменениях структуры и химического состава органической фракции почвы. Многие грибы и актиномицеты, находящиеся в почве, являются продуцентами антибиотиков — пенициллина, стрептомицина и др. Соотношения между разными группами микроорганизмов в почвах неодинаковы и могут быстро изменяться под действием тех или иных факторов.

Патогенные микроорганизмы могут попасть в почву с выделениями человека и животных. Эти микробы делятся на три группы.

К первой группе относятся патогенные микробы, для которых почва является постоянным местом обитания. Это возбудители ботулизма, актиномицеты, грибы, вызывающие микозы. Вторая группа представлена споровыми бациллами, для которых почва является вторичным резервуаром, где они сохраняются длительное время. Так, споры сибиреязвенных бацилл сохраняются в почве скотомогильников многие десятилетия.

Третья группа — патогенные микробы и вирусы, которые, попадая в почву с выделениями человека и животных, сохраняются там от нескольких часов до нескольких месяцев. Опасность передачи через почву заболеваний, вызванных этими возбудителями, невелика и зависит от интенсивности обсеменения микробами.

По эпидемическим показаниям проводят исследование почвы с. целью выделения патогенных микроорганизмов. Особое значение почва приобретает в военное время, когда увеличивается опасность загрязнения ран землей, содержащей споры возбудителей столбняка и газовой гангрены.

Почва может представлять опасность в эпидемиологическом отношении, так как она является субстратом, весьма благоприятным для развития микроорганизмов в силу содержания значительного количества органических веществ. Особенно много микроорганизмов может находиться в почве, загрязненной выделениями человека, животных и продуктами животного происхождения.
Но в почве постоянно происходит интенсивный процесс естественного самоочищения, в силу которого большинство попавших в нее патогенных микроорганизмов погибает. Тем не менее некоторые из них могут сохранять в ней свою жизнеспособность в течение срока, достаточного для того, чтобы произошло заражение человека.
Наибольшую опасность в этом отношении представляют возбудители столбняка, газовой гангрены, сибирской язвы (т. е. споровых микроорганизмов, длительно сохраняющихся в почве). Почва играет большую роль в передаче глистных заболеваний.
Наиболее часто через почву передаются геогельминты: аскариды, власоглавы, анкилостомы. Яйца этих гельминтов после выделения их из организма носителя созревают до стадии инвазионности (т. е. способности проникать в организм) в почве. Поэтому непосредственно через почву, пораженную геогельминтами, происходит заражение человека. Значительно меньшую роль играет почва в передаче биогельминтов — свиного и бычьего цепней. Эти гельминты имеют сложный цикл развития, который включает основного и промежуточного хозяина. Яйца биогельминтов, попадая с выделениями носителя в почву, могут находиться (но не созревать!) в ней в жизнеспособном состоянии длительный срок до тех пор, пока не попадут в организм промежуточного хозяина (свиньи, крупного рогатого скота). Здесь, в организме промежуточного хозяина, происходит дальнейшее развитие этих гельминтов. Поедая недостаточно термически обработанное мясо таких зараженных животных человек заболевает. Таким образом, в передаче биогельминтов почва имеет косвенное значение.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: