Техника безопасности. Будьте внимательны при работе с 10% щелочью натрия и дифениламиновым реактивом.

Будьте внимательны при работе с 10% щелочью натрия и дифениламиновым реактивом.

РАБОТА 15. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ РИБОЗЫ

ПО МЕТОДУ МЕЙБАУМА

Рибоза входит в состав РНК, нуклеотидов и некоторых коферментов. Существуют колориметрические методы определения содержания указанных веществ, основанные на количественном определении рибозы.

Метод Мейбаума основан на способности рибозы к дегидратации с образованием фурфурола, дающего с орцином соединение, окрашенное в сине-зеленый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию рибозы.

Ход работы

1. Построение калибровочной кривой

В пять сухих пробирок вносят основной стандартный раствор рибозы (содержит 12,5 мкг рибозы в 1 мл) и дистиллированную воду в количествах, указанных в таблице:

В контрольную пробирку наливают 1 мл дистиллированной воды. Во все пробирки добавляют автоматической пипеткой по

1 мл орцинового реактива, перемешивают и помещают в кипящую

водяную баню на 20 минут. Затем пробирки охлаждают под струей холодной воды, добавляют по 3 мл дистиллированной воды и содержимое перемешивают. Рабочие стандартные растворы

колориметрируют на КФК-2 против контроля в кюветах на 10 мл с красным светофильтром (длина волны 670 нм). Результаты определения оптической плотности используют для построения калибровочной кривой.

2. Определение количества рибозы в исследуемомрастворе

К 1 мл исследуемого раствора рибозы добавляют 1 мл орцинового реактива и далее анализ проводят так же, как при построении калибровочной кривой.

Концентрацию рибозы находят по калибровочной кривой.

Оформление работы

1. Результаты измерения оптической плотности стандартных растворов записать в таблицу:

Е_1, Е₂, Е₃ - значения оптической плотности одного стандартного раствора, полученные разными студентами.

2. Построить калибровочную кривую.

3. Записать, какое количество рибозы оказалось в исследуемом растворе (в мкг/мл).

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: