ТОР 5 статей: Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы КАТЕГОРИИ:
|
Демонстрация мазков кислотоустойчивых бактерий, окрашенных по Цилю-НильсенуДемонстрация окраски спор по Цилю. Контрольные вопросы
Задание Каждый студент должен: Приготовить и рассмотреть под микроскопом в иммерсионной системе: 1. Мазок из кислотоустойчивых бактерий в окраске по Цилю-Нильсену:
2. Мазок из спорообразующих бактерий в окраске по Цилю: - мазок высушить на воздухе, фиксировать на пламени - покрыть полоской фильтровальной бумаги, на которую нанести карболовый раствор фуксина Циля - подогреть в течении 6-8 минут до образования паров (краску периодически добавляют, не давая мазку подсохнуть - мазок тщательно промыть водой - на 30-60 секунд нанести на него солянокислого алкоголя (96о этилового спирта, содержащего по объему 3% соляной кислоты), доведя оттенок препарата до слабо розоватого - промыть мазок водой - докрасить метиленовой синькой Леффлера в течении 5 минут - промыть водой, высушить на воздухе и микроскопировать
3. Зарисовать в тетради микроорганизмы, видимые в поле зрения. Контрольные вопросы (письменный ответ в тетради):
Лабораторное занятие №4
МИКРОСКОПИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ В МИКРОБИОЛОГИИ (продолжение) Цель – ознакомление с методами окраски капсулы и включений бактерий. Материалы и оборудование: бактериологическая петля, предметные стекла, пробирки, ватные пробки, спиртовка или газовая горелка, растворы красителей Капсула бактерий. При определенных условиях культивирования многие виды бактерий различных таксономических групп образуют слизистое вещество, формирующее вокруг клетки структуру, которая называется капсулой. Колонии капсулообразующих бактерий имеют влажную, блестящую поверхность и называются мукоидными. Среди сапрофитных бактерий капсула хорошо выражена у представителей родов Azotobacter, Leuconostoc, Rhizobium, патогенных - Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae, Bacillus anthracis и др. Капсула предохраняет клетку от обезвоживания, механического повреждения, капсульное вещество создает вокруг клетки дополнительный осмотический барьер, регулирующий поступление и выделение различных веществ и ионов, а также аэрацию бактерий. Лучше всего капсулы выявляются во влажных препаратах, так как составляющие их сильно гидратированные коллоидные полимеры легко разрушаются и сокращаются в размерах при высушивании и фиксации. Окраска капсул по методу Ребигера. На высушенный мазок наносят краску Ребигера, окрашивают 40 сек – 1 мин. Препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. Клетки бактерий, окрашенные в синий цвет, окружены бесцветными или слабо-розовыми капсулами. Окраска капсул по методу Гинса. На хорошо обезжиренное предметное стекло (ближе к его концу) с помощью пастеровской пипетки или микробиологической петли помещают каплю черной туши, в нее вносят исследуемый материал. Жидкость перемешивают и ребром второго предметного или покровного стекла делают мазок по поверхности первого. Мазок высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова в течение 5-10 минут и окрашивают раствором карболового фуксина Циля, разбавленного водой 1:3, в течение 2-3 минут. Препарат промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют. На темно-сером фоне препарата контрастно выделяются розово-малиновые клетки бактерий, окруженные бесцветными капсулами.
Выявление капсул на негативном прижизненном препарате (негативное контрастирование). На хорошо обезжиренное предметное стекло помещают (в центре) каплю неразведенной черной туши и вносят в нее каплю исследуемого материала. Смесь тщательно перемешивают и накрывают покровным стеклом, осторожно прижимая к предметному полоской фильтровальной бумаги. Препарат микроскопируют, пользуясь объективом МИ-90. На темном фоне выявляются прозрачные неокрашенные зоны капсул вокруг микробных клеток. Выявление некоторых цитопазматических (внутриклеточных) включений. У многих бактерий, выращиваемых в определенных условиях, в результате обменных процессов в цитоплазме образуются отложения, которые называют включениями. Среди них - кристаллы щавелевой кислоты, зернышки аморфного карбоната кальция, отложения жира, поли-β-гидрооксимасляной кислоты, полифосфатов, полисахаридов, гранулы углеводной природы - гликоген (животный крахмал) и гранулеза (крахмало-подобное вещество), серы и различных кристаллов. Эти включения представляют собой продукты клеточного обмена; одни из них следует рассматривать как запасные питательные вещества, другие - как отходы метаболизма клетки. Для выявления этих включений, которые сильно преломляют свет, применяется несколько методов. Гранулы волютина или метахроматические зерна (метахроматин) представлены полифосфатами и веществами, близкими к нуклеиновым кислотам - запасающимся веществом, которое служит источником фосфатных групп. В них сосредоточены запасы фосфора. Волютин обнаруживается в виде крупных гранул в вакуолях дрожжей или цитоплазме бактерий (уксуснокислых, молочнокислых, азотфиксирующих) и актиномицетов. Название «волютин» произошло от Spirillum volutans, в клетках которой он был впервые обнаружен. Включения волютина хорошо выражены у Spirillum volutans, Bacillus subtilis, молочнокислых бактерий, дрожжей, в клетках Asotobaster, а также у возбудителей сибирской язвы и дифтерии. Гранулы волютина имеют относительно крупные размеры, окрашиваются различными красителями, изменяя цвет последних. Например, при окрашивании метиленовым синим волютин окрашивается в ярко-красный цвет. Такое явление получило название метахромазии. Окраска волютина по методу Омелянского. Тонкий мазок исследуемого материала высушивают на воздухе, фиксируют на пламени, окрашивают раствором карболового фуксина 30-40 сек. и промывают водой. Затем препарат дифференцируют, погружая его в склянку с 1%серной кислотой, или наливают ее на поверхность препарата на 20-30 сек. и немедленно промывают водой. Серная кислота обесцвечивает цитоплазму, а зерна валютина остаются окрашенными фуксином. Препарат докрашивают раствором метиленовой сини Леффлера (1:40) 20-30 секунд, промывают водой, высушивают на воздухе и микроскопируют, пользуясь объективом МИ-90. На препарате зерна валютина окрашены в красный цвет, цитоплазма клетки - в голубой. Окраска волютина по методу Леффлера. Тонкий мазок культуры микроорганизма высушивают на воздухе, фиксируют на пламени, окрашивают раствором метиленовой сини Леффлера в течение 3-х минут, промывают водой, и рассматривают, пользуясь объективом МИ-90. На препарате зерна волютина окрашены в красновато-фиолетовый цвет, а цитоплазма - в голубой. Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:
|