КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ

В естественных условиях микроорганизмы, заселяю­щие почву, воду, воздух и окружающие нас предметы и субстраты, живут и развиваются в ассоциации с боль­шим количеством различных видов и групп микробов. Для того чтобы определить вид, изучить его морфоло­гические и физиологические особенности и роль пред­ставителей данного вида микробов в естественных про­цессах, необходимо изолировать его из смеси организ­мов и выделить в чистую культуру.

Выращивание микроорганизмов на питательных средах назы­вают культивированием (от лат. cultus — выращивание), а развившиеся в результате микроорганизмы — культурой. При развитии в жидкой среде культуры образуют суспензию, осадок или пленку, при развитии на плотной среде — колонии. Культура может быть чистой — содержать потомство клетки только одного вида и накопительной — состоять преимущест­венно из клеток одного вида микроорганизмов.

Видимое невооруженным глазом изолированное скопление микроорганизмов, выросших на плотной пи­тательной среде в результате размножения одной или нескольких клеток, называют колонией.

Основным этапом любого микробиологического исследования является выделение микроорганизмов в чистые культуры из исследуемого материала, содер­жащего смесь различных микробов.

Материалом для исследования могут быть образцы почвы, семена, надземные части или корни растений, вода, растительные соки, различные выделения орга­низма животных и человека и т. д. Доставленный в ла­бораторию материал подвергают бактериологическому исследованию в тот же день.

Внесение клеток микроорганизмов или какого-либо ис­следуемого материала (образца почвы, пробы воды) в стериль­ную питательную среду для получения чистой или накопи­тельной культуры называют посевом. Перенесение уже выра­щенных клеток из одной среды в другую (стерильную) называют пересевом, или пассированием (от лат. passus — чере­дование).

Обычно микроорганизмы выращивают при определен­ной постоянной температуре в термостатах (деревянных или металлических шкафах) или термостатных комнатах. В тех и других постоянная температура поддерживается с помощью терморегуляторов.

Культивирование при определенной температуре называется инкубацией, или инкубированием (от лат. incubatio — выра­щивание, высиживание птенцов).

Выращивают микроорганизмы в стеклянной посуде: про­бирках, колбах или чашках Петри. Для этого стеклянную посу­ду, не бывшую в употреблении, очищают от щелочи кипячени­ем в растворе, содержащем К₂Сr₂O₇ (6%) и концентрирован­ную H₂SO₄ (6%).

В пробирках микроорганизмы культивируют как в жидких, так и на плотных средах. Жидкой средой для аэробных культур заполняют обычно ¹/₃ пробирки, для анаэробных — ²/₃.

После стерилизации пробирки с еще не застывшей сре­дой раскладывают на ровной поверхности стола в наклонном (под небольшим углом) положении для получения скошенной поверхности агара. Это так называемые косяки — косые или скошенные среды.

Плотная среда, застывшая при вертикальном положении пробирки, называется столбиком. Столбики питательной сре­ды, занимающей '/₃—'/г объема пробирки, используют для по­сева культуры уколом. Столбики питательной среды, занимаю­щие ²/₃ объема пробирки, после стерилизации применяют для заливки стерильных чашек Петри, предназначенных для мик­робиологических посевов.

ПОЛУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР

Для выделения бактерий в виде чистых культур из­вестно сравнительно мало методов. Чаще всего это де­лают путем изолирования отдельных клеток на твердой питательной среде, используя метод посева штрихом или разлива по чашкам небольшого количества жидко культуры. Однако получение отдельной колонии не все да гарантирует чистоту культуры, поскольку колон могут вырасти не только из отдельных клеток, но из их скоплений. Если микроорганизмы образуют слизь, то ней часто прикрепляются посторонние формы. В случае выделения штаммов Bacillus или актиномицетов контаминирующие микроорганизмы могут быть опутаны цепочками клеток или соответственно гифами этих бак­терий.

Из чистой культуры обычно вырастают одинаковые колонии и при микроскопировании выявляются похожие клетки, в частности по размеру и окраске по Граму. Однако возможны исключения, например, колонии, вы­растающие из чистой культуры, могут быть гладкие (S) и шероховатые (R). Кроме того, в чистых культурах различных микроорганизмов могут появиться кокковидные клетки, цисты и споры.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: