Посев штрихом или разливом на твердую среду

Существует много методов посева штрихом в чашки с твердыми средами («штрихованные чашки»), но лишь один из них (рис.2) почти всегда дает хорошо изоли­рованные колонии даже при отсутствии навыков у экс­периментатора. Кроме того, можно наливать разведен­ные растворы смешанной культуры на поверхность твер­дых сред в чашках. При работе с анаэробами «штрихованные чашки» или чашки с внесенной в них жидкой культурой в атмосфере воздуха инкубируют затем в анаэростате. Для анаэробов необходимы свежеприготовленные среды, и посев штрихом следует проводить в течение первых 4 ч после их автоклавирования, чтобы избежать накоп­ления растворенного кислорода.

Рис.2. Удобный метод посева штрихом в чашки для получения отдельных колоний. А. Для маркировки на обратной стороне чашки Петри карандашом наносят букву Т, разделяющую дно на 3 сектора. Б. Петлей с культурой зигзагом наносят штрихи на поверхности агара в секторе 1, как показано на рисунке. Для этого крышку чашки сначала приподни­мают, а после нанесения штриха сразу закрывают. Петлю стерилизуют в пламе­ни и дают ей остыть (15 с). В. Проводят петлей по по­верхности среды в секторе 1, как показано на рисунке, и затем немедленно наносят ею зигзагом штрихи на по­верхности среды в секторе 2. Прогревают петлю в пла­мени и дают ей остыть. Г. Проводят петлей по поверхности среды в секторе 2, как показано, и затем наносят ею зигзагом штрихи на поверхности среды в секторе 3. Д. Инкубируют опрокинутые вверх дном чашки, как показано на рисунке, для того чтобы конденсирующаяся во­да с крышки не попала на поверхность агара. В секторе 1 вырастает большое чис­ло колоний, тогда как в сек­торах 2 и 3 появляются от­дельные хорошо изолирован­ные колонии.

Посев на плотные среды в чашках Петри осущест­вляют различными методами в зависимости от необхо­димости вырастить микроорганизмы в толще среды или на ее поверхности:

а) для глубинного посева (в толще среды) используют обычно мерные количества плотной среды, заготовленные в пробирках по 10—15 мл. Культуру вно­сят в пробирки с расплавленным и охлажденным до 40—45°С агаром, а затем заливают смесь в чашку Пет­ри. Возможен и другой способ глубинного посева: взвесь
микроорганизмов вносят непосредственно в стерильную чашку Петри на дно, слегка, приоткрыв крышку, а затем заливают ее расплавленным и охлажденным агаром. Среду с культурой тщательно перемешивают круговыми движениями чашки, не поднимая ее с поверхности стола, и оставляют чашку на столе до застывания агара;

б) для поверхностного роста исследуемый материал наносят на поверхность уже застывшей среды. Распределение материала по пластинке агара можно выполнить с помощью шпателя или бактериологической петли. При посеве шпателем (стеклянной палочкой, согнутой в виде треугольника) чашка с застывшей средой находится на поверхности стола. Левой рукой слегка приоткрывают крышку, а правой вносят на поверхность агара определенное количество (петлю, каплю или определенный объем) культуры. Круговыми движениями шпателя распределяют культуру по всей поверхности среды. Затем переносят шпателем культуру в следующую чашку и таким образом последовательно в 3-5 чашек. При использовании для посева бак­териологической петли осуществляют посев штриховым способом. Чашку Петри кладут на стол дном кверху и левой рукой поднимают только ее основание со средой; держат дно чашки в руке вертикально и осторожно, не взрыхляя среды, наносит культуру петлей зигзагообраз­ными движениями (штрихом).

ПРОВЕДЕНИЕ ЗАНЯТИЯ

Задание

1.Произвести посев из смешанной культуры на агар Хоттингера штрихом для выделения чистой культуры

2. Записать в тетради методики посевов петлей, шпателем

3. Записать в тетради виды питательных сред и их характеристику

Контрольные вопросы

1. Что такое “посев” микроорганизмов и методы посевов?
2. Что такое накопительная культура?
3. Что называется чистой культурой?
4. Способы получения чистых культур (истощающий посев штрихом, газоном, уколом, истощающий посев разливкой или метод пластинчатых разводок Коха)

Лабораторные занятия по общей микробиологии

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: