Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Алгоритм практичної роботи




Робота 1. Для формування лейкоцитозу в черевну порожнину білої миші за 4-6 годин до досліду був введений м’ясо-пептонний бульйон. При вивченні фагоцитозу введіть шприцом у черевну порожнину 0,5-1 мл густої суспензії клітин стафілокока. Через 30-40 хвилин із черевної порожнини пастерівською піпеткою або шприцом витягніть 2-3 краплі ексудату, приготуйте мазки й пофарбуйте їх метиленовим синім. При мікроскопії знайдіть лейкоцити з фагоцитованими стафілококами. Зарисуйте.

 

Робота 2. Визначення фагоцитарної активності (ФА) і фагоцитарного індексу (ФІ) проводиться у готових препаратах. Для готування мазків у дитини, що хвора на стафілококову пневмонією, взяли 0,2 мл крові, яку змішали з розчином цитрату натрію. Потім додали 0,12 мл 2-мільярдної суспензії стафілокока. Після 30 хвилин інкубації в термостаті з крові були приготовлені мазки і пофарбовані за Романовським-Гімза, для вивчення показників фагоцитозу.

У різних полях зору порахуйте не менше 50 лейкоцитів і загальну кількість мікробів у них. Визначите відсоток фагоцитів, що захопили хоча б одну клітину стафілокока (ФА), і середнє число мікробів, що поглинув один лейкоцит (ФІ). Напишіть висновок.

ДЕМОНСТРАЦІЯ

1. Визначення активності лізоциму в слині.

Лізоцим являє собою протеолітичний фермент мурамідазу (від лат. Murus – стінка). Він викликає гідроліз ацетиламіно-полісахарида бактеріальних клітин, що приводить до порушення синтезу клітинної стінки. Лізоцим є захисним фактором слизових оболонок, міститься в сльозах, слині, крові, материнському молоці.

На демонстрації представлено визначення титру лізоциму в слині. Для цього зроблено ряд послідовних розведень слини (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000). П'ята пробірка є контрольною і не містить лізоциму. В усі п'ять пробірок додано по 1 мл суспензії Micrococcus lisodeicticus, що містить 1 млрд. мікробних клітин у 1 мл. Після інкубації в термостаті протягом 3 годин визначають титр лізоциму – останнє розведення, в якому спостерігається лізис бактерій.

2. Фагоцитоз у новонародженої і дорослої людини.

Фагоцитарну функцію здійснюють поліморфно-ядерні лейкоцити (ПМЯЛ).

Фагоцитуючі клітини звільняють організм від чужорідного матеріалу: мікроорганізмів, токсинів, вірусів. Це здійснюють поліморфно-ядерні лейкоцити (ПМЯЛ) і моноядерні фагоцити (моноцити і макрофаги), що утворюються з поліпотентних стовбурних клітин кісткового мозку.

Морфологічною особливістю ПМЯЛ є добре виражена грануляція цитоплазми. По здатності гранул фарбуватися барвниками ПМЯЛ підрозділяють на еозинофіли (фарбуюються еозином), базофіли (фарбуються метиленовим синім), нейтрофіли (фарбуються сумішшю метиленового синього і еозина). Усі ПМЯЛ здатні до фагоцитозу, але тільки нейтрофілам властива висока фагоцитарна активність, що обумовлює природню резистентність організму.

Функціональний стан ПМЯЛ оцінюють по фагоцитарній і бактерицидній активності, хемотаксичним і міграційним властивостям цих клітин.

Макрофаги в організмі знаходяться у вільному та фіксованому станах. На поверхні фагоцитів розташовані специфічні рецептори до Ig і третього компонента комплементу (С3), які сприяють імунному фагоцитозу.

Другою функцією макрофагів є індукція імунної відповіді організму на чужорідні агенти, так як вони є антигенпрезентуючими клітинами. Критеріями функціональної активності макрофагів є фагоцитарна активність, бактерицидні властивості, здатність до розпластання, агрегації, контактування через цитокіни та рецептори з лімфоцитами.

У дорослих людей спостерігається завершений фагоцитоз стафілококів. У лейкоцитах видні рівномірно пофарбовані коки в невеликій кількості. У новонароджених дітей фагоцитарна здатність клітин у стадії поглинання бактерій майже однакова з активністю клітин дорослої людини, однак завершеність фагоцитарної реакції виражена менше, ніж у дорослих. Фагоцитовані стафілококи залишаються живими у середині лейкоцитів. Розмножуючись, вони накопичуються у великій кількості і розносяться по організму, при цьому фагоцитоз втрачає захисний характер і сприяє генералізації інфекції. Причиною незавершеності фагоцитозу є незрілість ферментних систем (ензимопатія) лейкоцитів новонародженої дитини. У недоношених дітей незавершеність фагоцитозу відзначається більш тривалий час.

3. Визначення бактерицидної активності сироватки крові.

Бактерицидна активність сироватки крові – здатність до знищення патогенних бактерійв – обумовлена дією гуморальних факторів неспецифічної резистентності (лізоциму, лактоферину, комплементу) і нормальних антитіл.

Дослід 1. Готується ряд розведень сироватки, у які додається стандартна суспензія бактерій.

Дослід 2. Після інкубації в термостаті з кожного розведення роблять висів. Сектор чашки з МПА, що відповідає титру бактерицидної активності сироватки крові, - це найбільше розведення сироватки, у якому відсутній ріст бактерій.

4. Визначення бактерицидності нейтрофілів за допомогою тесту відновлення тетразолія нітросинього (НСТ-тест). Принцип тесту полягає в тому, що при активації фагоцитуючих клітин (нейтрофілів) відбувається відновлення розчинного безкольорового тетразолія нітросинього в диформазан, який розподіляється в цитоплазмі або на поверхні фагоцитів у вигляді гранул, забарвлених в темно-синій колір. Цей тест відображає ступінь активації кисеньзалежних механізмів бактерицидної активності фагоцитуючих клітин, в основі яких є активація НАДФ-Н2-оксидази і гексомонофосфатного шунта. В результаті ряду реакцій утворюються активні форми кисню (супероксидний аніон О2-), які мають бактерицидну активнність і відновлюють тетразолій нітросиній.






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных