Приготовление гистологических срезов

Вопросы к экзамену

1. Оценка гистологического среза с помощью светового микроскопа

2. Устройство светового микроскопа

3. Примеры ядерных красителей

4. Объекты цитологических и гистологических исследований

5. Основные этапы приготовления гистологического препарата

6. Окрашивание артерий орсеином

7. Окрашивание липидов Суданом

8. Особенности окраски на гликоген

9. Окраска соединительной ткани (Ван-Гизон)

10. Способы фиксации материала, фиксаторы

11. Проводка гистологического материала, заливка в парафин

12. Приготовление срезов

13. Депарафинирование и окрашивание срезов

14. Гистохимические методы

15. Исследование желудка и кишечника

16. Срочная биопсия. Особенности окрашивания гистологического препарата

17. Организация рабочего места лаборанта гистолога

18. Функциональные обязанности лаборанта гистолога

19. Устройство микротомов и их использование

20. Устройство криостата и использование низкотемпературного микротома

21. Кислые красители

22. Замораживающий микротом

23. Гистологические препараты лимфоидной ткани

24. Правила приёма гистологического материала

25. Особенности приготовления препарата для исследования костной ткани

26. Окраска коллагеновых волокон по Маллори

27. Окраска по Романовскому – Гимзе

28. Приготовление мазков отпечатков (клеточный состав селезёнки)

29. Определения молярность, осмос, буфер

30. Все растворы (молярный, изотонический и другие)

№1

Каким должен быть хороший препарат:

1. Сохранение прижизненного строения ткани (своевременный забор, правильная фиксация).

2. Срез должен быть тонкий и полупрозрачный для прохождения света через него.

3. Изучаемые микроструктуры должны чётко выделяться на общем фоне препарата (окраска).

4. Не должно быть разрывов, складок, пузырьков.

№2

. Микроскоп состоит из оправы и двух увеличительных стекол. В зрительную трубку, или тубус, этого микроскопа вставлены увеличительные стекла (линзы). В верхнем конце тубуса находится окуляр (от латинского слова «окулус» — глаз), через который рассматривают различные объекты. На нижнем конце тубуса помещается объектив (от латинского слова «объектум» — предмет), состоящий из оправы и нескольких увеличительных стекол. Тубус прикреплен к штативу. К штативу прикреплен также предметный столик, в центре которого имеется отверстие и под ним зеркало. Пользуясь световым микроскопом, можно видеть изображение объекта, освещенного с помощью этого зеркала. Чтобы узнать, насколько увеличивается изображение при использовании микроскопа, надо умножить число, указанное на окуляре, на число, указанное на используемом объекте. Например, если окуляр дает 10-кратное увеличение, а объектив 12-кратное, то общее увеличение 10x12 = 120 раз.

№3

Ядерные красители

1. Гематоксилин (ядра синие)

2. Кармин (ядра розовые)

3. Бриллиантовый зелёный (ядра зелёные)

4. Метиленовая синька (ядра синие)

№4

Цитологические исследования – мазки, отпечатки, отделяемое – то, что на стекле.

Гистологические исследования – ткани.

№5,№11

Этапы приготовления гистологического препарата:

1. Сбор материала (биопсия, аутопсия людей, от специально умерщвлённых животных).

2. Фиксация – сохранение в исследуемом кусочке того строения, что и при жизни. В основе фиксации лежат физич. и химич. процессы, в первую очередь процесс коагуляции белков. Фиксирующая жидкость должна быстро проникать в ткань, действовать мягко, не вызывая грубых нарушений ткани (сморщивание, чрезмерное уплотнение).

Чтобы срезы получились тонкими (4-6 микром), материал надо сделать достаточно плотным и, в то же время, не хрупким, чтобы он при резке не крошился и не деформировался (складки).

3. Обезвоживание происходит в спиртах увеличивающейся концентрации (от 70 до абс.).

4. Удаление спирта происходит при помощи ксилола (вытесняет спирт из тканей).

5. Пропитка парафином (56t)

Пример проводящей батареи:

формалин - спирты - ксилол - парафин

Заливка в парафин

№6-№9

Смотри в таблице 3-6 столбик

№10

Методы фиксации – углекислотой, жидким азотом (мгновенно), водой (охлаждение до льда), спецжидкостью.

Фиксирующие жидкости:

1. Простые – метанол, этанол, ледяная уксусная к-та, хлороформ, ацетон, формалин (10, 20%).

2. Сложные (смеси) – жидкость Ценкера (сулемовая смесь), жидкость Карнуа, Буэна.

Правила фиксации

1. Размер кусочков должен быть таким, чтобы произошло его полное пропитывание в оптимальные сроки.

2. Количество фиксирующей жидкости должно не менее чем в 20 раз превышать объём материала.

3. Материал надо помещать так, чтобы он пропитался со всех сторон.

4. Соблюдение времени фиксации.

5. Фиксация закончена, когда жидкость полностью пропитала материал, когда получилась равномерная окраска и одинаковая консистенция тканей на поверхности разреза.

№11

Проводка — процесс дегидратации (обезвоживания) фрагмента ткани и пропитки его парафином. Этот этап обеспечивает уплотнение ткани, которое, в свою очередь, необходимо для получения срезов. Заливка — процесс создания блока, достаточно твердого, чтобы быть пригодным для резки (микротомирования). Выполняется путем заливания фрагмента ткани жидким парафином, целлоидином, пластмассой или специальными средами для заливки. Затем залитую ткань остужают до затвердевания блока.

№12

Приготовление гистологических срезов

1. Приготовление стёкол (стёкла должны быть чистые, обезжиренные маркированные). Обработка белком, глицерином, кристаллами тимола.

№13

1.Депарафинация – освобождение срезов от парафина.

1. 2-4 порции ксилола

2. Нисходящая батарея спиртов

3. Если краситель водный – до воды, если спиртовой – до соответствующего спирта.

2.Окрашивание срезов – смотри в таблице «Морфологическая» (1 столбик)

№14

Гистохимия объединяет в себя гистологические и биохимические методы. При гистохимических реакциях органические и неорганические вещества, входящие в состав клеток, вступают в химическую реакцию с реактивами и образуют окрашенные продукты реакции. Гистохимические реакции строго специфичны, основаны на определённых химических механизмах. Чтобы получить достоверный результат нужна особая точность и тщательное соблюдение всех этапов работы. Например, подготовка материала, этапы и приёмы проведения реакции должны строго соблюдаться, так как отклонение на любом этапе может привести к изменению хода реакции и неправильной оценки препарата врачом. Полисахариды неспособны реагировать с красителем, поэтому перед окраской надо провести окисление йодной к-той, при этом освобождаются или создаются вновь химические связи, способные реагировать с соответствующим реактивом.

№15

Исследования желудка, кишечника – гастро, колоноскопия.

Материал очень мелкий, всё надо делать аккуратно. Срез брать с середины кусочка. По возможности класть на ребро. Используется кассета со спецпрокладками, чтобы материал не потерялся и не вывалился. Обезвоживание в спиртах 45 мин.

№16

Биопсия – иссечение тканей из живого организма с целью морфологических исследований для определения характера патологического процесса. Методы проведения: иссечение кусочка органа хирургическим инструментом, соскабливание поверхностных слоёв участка поражения, пункция (взятие материала при помощи специгл), отрыв частиц слизистых оболочек органов при помощи спецприборов (гастро, бронхоскопия).

Срочная (экстренная) биопсия нужна при операциях. Пример: при удалении опухоли требуется определить какая она: если доброкачественная, удаляют опухоль, если злокачественная, то и часть здоровых органов.

Окраска на срочной биопсии (максимальное время подготовки 10 мин) – главное скорость.

1. Резка на криостате (6 мк)

2. Фиксация в 20% нейтральном формалине

3. Обезвоживание в 96 спирте

4. окраска Гематоксилином Вегерта(спиртовой, железный) и далее окраска Ван-Гизон

№18, №24

Приём, регистрация, обработка биопсийного материала. Материал доставляют в фиксирующей жидкости (10% формалин). На банке с материалом должны быть: маркировка, ФИО больного, № истории болезни, что за материал, бланк направления (диагноз, что за материал). Биопсийный материал очень мелкий, кусочки органов берут из труднодоступных мест, манипуляция связана с риском. Принятый материал маркируется, регистрируется, описывается, данные вносятся в бланк направления, и кусочки материала вырезаются для исследования. Исследования проводятся в течение 2-3 дней (костная ткань до 7 суток в связи с декальцинацией).

№19, №20, №22

Устройство микротомов – блокодержатель, ножедержатель, столик, ручка.

Виды:

1. Обычный – есть водопад.

2. Криостат – используется также при операциях. Температура -23-25. Охлаждается при помощи воды.

3. Замораживающий – охлаждается столик и нож фрионом, ткань фиксированная.

№21

Кислые красители (кислота или её соль, окрашивающая вещества основной природы)

Эозин, кислый фуксин, конго красный, пикрофуксин.

Основные красители (основание или его соль, окрашивающие вещества кислой природы)

Гематоксилин, тиамин, метиловый зелёный.

№23

Лимфоидная ткань перекрашивается, поэтому окраска щадящая, резка на 4 микрона.

№25

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: