Осаждение белков нейтральными солями (высаливание).

Выпадение белков в осадок при действии на них растворов нейтральных солей аммония, щелочных и щелочноземельных металлов называется высаливанием. Этот процесс основан на дегидратации белков и нейтрализации зарядов белковых частиц адсорбирующимися на них ионами соли. При этом белковые растворы теряют устойчивость, частицы белка слипаются и выпадают в осадок.

Изменяя концентрации солей, можно выделить различные белковые фракции. Так, в случае высаливания хлоридом натрия, глобулины (pHИЭТ = 6.6) осаждаются насыщенным раствором соли, а для осаждения альбуминов (pHИЭТ = 4.8) необходимо добавить 1%-ный раствор уксусной кислоты для нейтрализации заряда белка.

Реактивы: раствор яичного белка с хлоридом натрия, кристаллический хлорид натрия (тонко растертый порошок в виде пудры), 1%-ный раствор уксусной кислоты, 1%-ный раствор гидроксида натрия, 1%-ный раствор сульфата меди.

^ Приготовление раствора белка (с добавлением хлористого натрия).

Белки трех куриных яиц отделяют от желтков, растворяют в 7 мл дистиллированной воды и приливают 3 мл насыщенного раствора хлорида натрия. Раствор фильтруют через марлю, сложенную в 3-4 слоя. Хранят в холодильнике.

Выполнение работы. В пробирку наливают 3 мл раствора яичного белка и добавляют до получения насыщенного раствора порошок хлорида натрия. Через 5-6 минут в пробирке наблюдается выпадение осадка глобулинов. Альбумины из нейтральных растворов солей щелочных и щелочноземельных металлов не осаждаются. Содержимое пробирки отфильтровывают через бумажный фильтр.

В фильтрате остаются альбумины, для их осаждения раствор подкисляют 1%-ным раствором уксусной кислоты. Появившийся осадок отфильтровывают, а в фильтрате с помощью биуретовой реакции доказывают отсутствие белка.

Контрольные вопросы.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ ЖЕЛАТИНА.

В изоэлектрической точке растворы белков неустойчивы и белок легко выпадает в осадок. Выпадение белка в осадок можно ускорить добавлением веществ, разрушающих гидратную оболочку белковых макромолекул (спирт, ацетон).

Реактивы и оборудование: 0,5%-ный раствор белка желатина, 0,1 н раствор уксусной кислоты, 0,1 н раствор уксуснокислого натрия, 96%-ный этиловый спирт, мерные пипетки на 2 мл.

Выполнение работы. Для определения изоэлектрической точки желатина в пять пробирок наливают растворы уксусной кислоты и уксуснокислого натрия в количествах, указанных в таблице 1. После чего в каждую пробирку добавляют по 1 мл раствора желатина и хорошо перемешивают, затем прибавляют по 4 мл этилового спирта и осторожно перемешивают стеклянной палочкой. Через 5-10 минут оценивают степень мутности каждой смеси по пятибалльной системе. рН наиболее мутной смеси соответствует изоэлектрической точке желатина. Результаты опыта записывают в таблицу 1.

Таблица 1. Определение изоэлектрической точки белка желатина.

Контрольные вопросы.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: