Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






С техникой выделения чистой культуры аэробов вы познакомились при выполнении лабораторной работы №7-8




Физические способы культивирования анаэробов. 1. Способ Виньяля‑Вейона. Берут 4-5 пробирок с 0,5% расплавленным и охлажденным до температуры 40-45°С сахарным агаром. В содержимое одной из них вносят пипеткой небольшое количество исследуемого материала и тщательно размешивают. Для уменьшения концентрации материала с целью получения изолированных колоний засеянную среду в количестве, соответствующем объему внесенного материала, переносят из 1-й пробирки во 2-ю, из 2-й в 3-ю. Затем содержимым каждой пробирки заполняют капилляры трех пастеровских пипеток.

Чтобы предупредить застывание питательной среды в момент насасывания ее в пипетки, кончик их, пока он не обломан, погружают на 3-5 мин в стерильную воду температуры 45-50°С. После заполнения вытянутый конец трубки запаивают и помещают в стеклянный цилиндр с ватой на дне. Через 2-3 сут в столбике агара вырастают ясно видимые колонии микробов-анаэробов. Выросшие колонии легко изолировать. Для этого капилляр надрезают напильником выше уровня намеченной колонии, надламывают, а колонию микроба, находящуюся в агаре, извлекают петлей и пересевают в свежую питательную среду.

2. Выращивание анаэробов в условиях вакуума. Вакуумные условия для выращивания анаэробов создают в анаэростате или эксикаторе. Исследуемый мате­риал или культуру микробов засевают в пробирки с жидкой средой или в чашки Петри с плотной питательной средой. Посевы помещают в анаэростат, затем присоединяют его к насосу и выкачивают воздух. Степень разреженности воздуха определяют по показаниям вакуумметра. Колонии анаэробов в вакуумных условиях растут на поверхности плотной питательной среды.

Химические методы выращивания анаэробов (метод Ари стовского). Материал, исследуемый на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно которого кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфит натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда устанавливают на подставке чашки с посевами. Прибор помещают в термостат при температуре 37 °С на 24-48 ч.

Биологический метод выращивания анаэробов (по Фортнеру). В чашку Петри наливают толстым слоем 5% кровяной агар с 1-2% глюкозы. Посередине чашки в питательной среде вырезают стерильным скальпелем канавку шириной 1-1,5 см, которая делит питательную среду на две половины. Одну из них засевают культурой анаэробов или исследуемым на их наличие материалом, другую половину ‑ культурой аэробов: кишечной палочкой. Перед посевом чашки подсушивают в термостате, чтобы аэробы вместе с капельками влаги не могли попасть на другую сторону чашки. Засеянные чашки закрывают, а свободное пространство между дном и крышкой заклеивают лейкопластырем, чтобы предупредить поступление в чашку кислорода извне. В термостате чашки устанавливают вверх дном. Быстрорастущие аэробы, поглощая находящийся в чашке кислород, создают тем самым благоприятные условия для роста анаэробов.

Анаэростат для культивирования анаэробов. Анаэростат — прибор для выращивания микробов в анаэробных условиях — представляет собой толстостенный металлический •цилиндр с герметически привинчивающейся крышкой, на которой имеются вакуумметр и два крана для присоединения к вакуум-насосу.

В современных лабораториях пользуются анаэробными камерами. Анаэробная камера – прозрачная, герметичная станция, может быть как перчаточной, так и безперчаточной. Необходимые условия создаются в ней посредством возникновения вакуума и добавления двухкомпонентного (N2 +H2) или трёхкомпонентного (N2+CO2+H2) анаэробного газа. Камера оснащена специальными шлюзами, для лёгкого введения необходимых образцов и материалов, термостатом, контролирующим влажность, приборы для регуляции концентрации кислорода и его вывода из рабочей зоны. Так как данный агрегат обеспечивает самое высокое качество культивирования среди своих аналогов, он является довольно дорогим удовольствием, в основном его могут позволить основные исследовательские лаборатории или же частные центры изучения. Кроме этого его удобство также обусловлено внушающей вместительностью до двухсот чашек Петри.

Более частовстречаемое использование в лабораториях это микроанаэростат. Микроанаэростат – бочкообразная, герметично закрываемая металлическая или пластмассовая ёмкость объёмом от 2 до 7 литров. Создание необходимых условий в агрегате происходит двумя способами:

1)вакуумозамещение – создаётся вакуум и запускается анаэробный газ.

2)Химическое связывание кислорода – с использованием газогенерирующей системы, генерирующие H2 и СО2. H2 – поглощает лишний кислород при появлении воды в системе, СО2 – является стимулятором роста для изучаемых микроорганизмов.

Контроль за бескислородной средой в микроанаэростатах контролируется специальной полоской-индикатором, которая при удалении кислорода из рабочей среды – обесцвечивается. Основным недостатком данного агрегата является то, что исследования проводятся в кислородосодержащей среде и только потом помещаются в микроанаэростат, из-за чего качество результатов уступает анаэробной камере. Вместимость его до двенадцати чашек Петри и в основном используется в небольших лабораториях.

 

ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ

 

Выделение чистой культуры анаэробов.

1. Анаэростат (стационарный, портативный). Удаляют воздух, а кислород могут замещать атмосферным азотом или другим инертным газом.

2. Среды под вазелиновым маслом (Кита-Тароцци).

3. Высокий столби гагара и посев уколом.

4. Трубки Бури и Виньяль-Вейона (трубки, заполненные сахарным агаром с парафинированными концами) помещенные в термостат.

5. Химический метод с использованием эксикаторов (на дно укладываетсяхим.вещество, связывающее кислород на подставку помещают засеянные чашки, крышку плотно притирают и ставят в термостат).

6. Метод Фортнера. Агаровую пластинку разделяют на две части, вырезав полоску. На одну половину сеют строгие аэробы, на вторую – анаэробы. Крышку парафинируют и затем ставят в термостат. Сначала вырастают аэробы, а при отсутсвии кислорода кислорода, начинают расти анаэробы (метод используется редко).

Задание 1.

Изучить состав сред Кита-Тароции и Вильсона-Блера.

Среда Кита-Тароцци (среда накопления. Состоит из МПА с 0,5% раствором глюкозы и кусочков печени, мясного фарша или ваты. Перед посевом среду кипятят 10-15 мин. Для удаления воздуха и быстро охлаждают. До или после посева для изоляции от атмосферного воздуха среду заливают стерильным вазелиновым маслом слоем в 1 см.

Среда Вильсона-Блера (железосульфитный агар). Состоит из МПА, к которому добавляют глюкозу, Na2SO3 FeCl2. Анаэробы образуют на этой среде колонии черного цвета за счет восстановления, Na2SO3 в Na2S, который при соединении с хлоридом железа дает осадок черного цвета FeS.

Задание 2.

Изучить рост анаэробов на среде Кита-Тароции, создать заключение с его особенностях.

(записать)

Задание 3.

 

Промикроскопировать и зарисовать демонстрационные препараты с анаэробами.

Препарат №

Препарат №

Препарат №

 

Схема выделения чистой культуры анаэробов по Цейслеру

(записать)

 






Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных