Особенности приготовления препарата для электронной микроскопии

⇐ Предыдущая 1 2 3 45

Электронная микроскопия бывает трансмиссионная (в проходящем пучке, подобно светооптической микроскопии) и сканирующая (снимающая рельеф поверхности). Первую применяют чаще, особенно для изучения в ультратонких срезах ткани деталей строения клеток, выявления микробов, вирусов, отложений иммунных и других комплексов и т. д.

Взятие материала и фиксация	Материал берут очень маленькими кусочками (порядка 1 мм ³), а фиксацию осуществляют обычно в 2 стадии: вначале глутаральдегидом(стабилизация белков), затем - четырёхокисью осмия (стабилизация фосфолипидов и контрастирование ткани).
Уплотнение материала	1. Образцы, как обычно, обезвоживают, а для их дальнейшего уплотнения используют эпоксидные смолы. Заливку производят в специальных формах, затвердевание смеси происходит путём её полимеризации в термостате, и затвердевшие блоки имеют вид маленьких свечей.
Приготовление срезов	1. Срез делают с помощью ультратома; их толщина - 30-50 нм (ср. с микротомными срезами - 10.000 – 20.000 нм). Затем их переносят на сеточки(играющие роль предметного стекла).
Окрашивание срезов	Окрашивание срезов сводится к их контрастированию с помощью солей тяжёлых металлов (свинца, вольфрама, урана). Эти соли осаждаются на фосфолипидах мембран и поглощают электроны. Поэтому соответствующие места клетки выглядят более тёмными.

Иммуногистохимическое исследование. При некоторых патологических состояниях (особенно опухолях) бывает трудно и даже невозможно с помощью гисто- или цитологических окрасок определить тип ткани либо ее происхождение (гистогенез). Между тем такая верификация имеет важное значение для диагностики и прогнозирования. Поэтому используют различные дополнительные методические подходы. Одним из них является иммуногистохимический метод: на гисто- или цитологические препараты наносят растворы с антителами к искомым антигенам: опухолевым, вирусным, микробным, аутоантигенам и др. Антигены при обычных гистологических окрасках тканей не видны. Антитела в сыворотках несут на себе метку: либо флюорохром, т. е. краситель, светящийся в темном поле (иначе говоря, дающий флюоресценцию), либо красящий фермент. Если искомый антиген есть в исследуемых тканях или клетках, то возникший комплекс антиген-антитело плюс маркер точно укажут его локализацию, количество, помогут изучить некоторые свойства.

Методы молекулярной биологии. В хорошо оснащенных патологоанатомических отделениях и научно-исследовательских институтах для прижизненной диагностики применяют методы молекулярной биологии: проточную цитометрию и техник угибридизации in situ. Проточная цитометрия необходима для количественного анализа содержания ДНК в клетках опухолей и других патологических субстратов. Гuбрuдuзацuя in situ (обычно в виде полимеразной цепной реакции) позволяет определить состав нуклеиновых кислот и сложных белков в изучаемом материале.

Исследование хромосом. С помощью хромосомного анализа выявляют отклонения в генетическом аппарате (геноме) клеток, имеющие врожденный или приобретенный характер. Этот анализ особенно важен при распознавании и изучении опухолей, различные варианты которых сопровождаются вполне специфическими маркерными перестройками или аберрациями хромосом.

Эксперuментальный матерuал. Эксперимент с достаточным количеством лабораторных животных позволяет моделировать и изучать болезни и патологические процессы на любом этапе их развития

⇐ Предыдущая 1 2 3 45

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных