Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом.

ПРИНЦИП МЕТОД А состоит в том, что степень рефракции обусловлена количеством растворенных в растворе частиц. Практически коэффициент рефракции сыворотки крови довольно точно свидетельствует о количественном содержании в ней белка.

ХОД АНАЛИЗА:

Взять 2 пробирки для центрифугирования. В одну отмерить 0,6 мл сыворотки крови, а в другую - 0,6 мл воды. Затем той же пипеткой в обе пробирки добавить по 0,6 мл насыщенного раствора сернокислого аммония. Раствор сернокислого аммония к сыворотке крови добавляют маленькими порциями, медленно, чтобы не образовались пузырьки при этом происходит осаждение глобулина. Легкими поворотами содержимое пробирки осторожно смешивают и центрифугируют пробирку с сывороткой крови 5 мин при скорости 1000 – 1500 об/мин.

Пока происходит центрифугирование сыворотки, рефрактометрируют:

1. Н₂О (дистиллированная)

2. Полунасыщенный раствор сернокислого аммония (2-ая пробирка).

3. Неосажденную сыворотку.

Записывают результаты рефрактометрирования - показатель рефракции (НД).

Рефракция солей сыворотки - величина постоянная и равна 0,002.

Из отцентрифугированной сыворотки берут каплю из прозрачного верхнего слоя и также рефрактометрируют.

РАСЧЕТ ДЛЯ АЛЬБУМИНОВ:

НД альбуминов = (НД осажденной сыворотки - НД полунасыщенного р-ра сернокислого аммония х 2 - 0,002/ показатель рефракции солей сыворотки).

1% р-р альбуминов имеет показатель рефракции равный 0,00177, затем рассчитывают процентное содержание альбуминов:

1% - 0,00177 1х НД альб.

Х% - НД альбуминов Х = 0,00177

РАСЧЕТ ДЛЯ ГЛОБУЛИНОВ:

НД альбуминов = (НД неосажденной сыворотки - НД воды - НД альбуминов - 0,002). 1% р-р глобулинов имеет показатель рефракции равный 0,00229. По пропорции находят содержание глобулинов:

1% - 0,00229 1х НД глоб.

Х% - НД глобулинов Х= 0,00229

По сумме альбуминов и глобулинов находят общий белок и коэффициент А/Г.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: