Техника безопасности. 1. До включения прибора в сеть проверить наличие заземления.
1. До включения прибора в сеть проверить наличие заземления.
2. Не оставлять КФК-2 и гальванометр включенными без надобности.
3. Следить за чистотой прибора.
4. Осторожно обращаться с кюветами.
РАБОТА 11. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА
В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ
Белки в щелочной среде реагируют с сульфатом меди с образованием комплексных соединений, окрашенных в сине-фиолетовый или красно-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в растворе.
Ход работы.
1. Построение калибровочной кривой
Готовят семь рабочих стандартных растворов белка разведением основного стандартного раствора (содержит 4 мг белка в 1 мл) дистиллированной водой, как указано в таблице:
№
проб
| Стандартный раствор, мл
| Н2О,
мл
| Содержание белка в пробе, мл
| Е
|
| 0,25
| 1,75
| 1,0
|
|
| 0,50
| 1,50
| 2,0
|
|
| 0,75
| 1,25
| 3,0
|
|
| 1,00
| 1,00
| 4,0
|
|
| 1,25
| 0,75
| 5,0
|
|
| 1,50
| 0,50
| 6,0
|
|
| 1,75
| 0,25
| 7,0
|
| Контроль
| -
| 2,00
| -
| -
|
Для приготовления контрольной пробы в пробирку наливают
2 мл дистиллированной воды. Во все рабочие стандартные растворы и контроль добавляют по 2,5 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 минут для развития окраски. Окрашенные стандартные растворы колориметрируют на КФК-2 против контроля в кюветах на 5 мл с зеленым светофильтром (длина волны 540 нм). Полученные значения оптической плотности используют для построения калибровочной кривой.
2. Количественное определение белка в сыворотке крови
Исследуемую сыворотку крови разбавляют дистиллированной водой в 40 раз (1мл сыворотки смешивают с 39 мл Н2О). К 2 мл разбавленной сыворотки добавляют 2,5 мл биуретового реактива и после перемешивания оставляют при комнатной температуре на 30 минут, а затем колориметрируют.
Контрольная проба вместо сыворотки содержит 2 мл дистиллированной воды. Измерение оптической плотности производится так же, как при построении калибровочной кривой.
Оформление работы
1. Записать величины оптической плотности стандартных растворов в виде таблицы:
№ пробы
| Содержание белка в пробе (мг)
| Е1
| Е2
| Е3
| Еср.
|
Е1, Е2, Е3 - значения оптической плотности одного стандартного раствора, полученные разными студентами.
2. Построить калибровочную кривую.
3. Рассчитать содержание белка в исследуемой сыворотке крови и сделать выводы.
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:
|