Главная

Популярная публикация

Научная публикация

Случайная публикация

Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Изучение влияния цитрата на скорость гликолиза




1. В соответствии с приведенной ниже таблицей готовят четыре пробирки: пробирку №1 – контрольная проба; пробирку №2 – инкубируемая проба; пробирку №3 – инкубируемая проба, содержащая ингибирующую концентрацию цитрата Na и пробирку №4 – инкубируемая проба, содержащую смесь цитрата и АМР.


 

Отмерить (мл) №1 №2 №3 №4
0,02 М раствор глюкозы 0,5 0,5 0,5 0,5
0,06 М раствор АТР 0,5 0,5 0,5 0,5
0,3 М раствор цитрата Na 0,5
Смесь цитрат Na / АМР, 0,6 М / 0,3 М   0,5
ФСБС 0,5 0,5

 

2. Пробирки помещают на 5 мин в лед.

3. Во все пробирки (не вынимая их изо льда) добавляют по 1,5 мл мышечного экстракта и тщательно перемешивают.

4. Пробу №1 оставляют во льду, а пробы №2, 3 и 4 инкубируют в течение 30 мин при 26° С в водяной бане.

5. После инкубации пробы №2, 3 и 4 ставят на лед.

6. Далее во всех пробах определяют содержание глюкозы и молочной кислоты, для этого с пробами поступают следующим образом:

· из пробы №1 сразу же после добавления экстракта отбирают 0,5 мл инкубационной смеси и переносят в пробирку, содержащую 2,5 мл H2O, 2 мл 5% раствора ZnSO4×7H2O и 1 мл 0.3М NaOH, и перемешивают;

· к оставшейся в пробе №1 инкубационной смеси приливают равный объем 5% раствора ТХУ;

· из проб №2, 3 и 4 отбирают 1 мл инкубационной смеси и переносят в пробирку, содержащую 2 мл H2O, 2 мл 5% раствора ZnSO4×7H2O и 1 мл 0,3 М NaOH, и перемешивают;

· к оставшимся в пробах №2, 3 и 4 инкубационным смесям приливают равные объемы 5% раствора ТХУ

· образующиеся осадки белков во всех пробах (и осажденных цинковой смесью, и осажденных ТХУ) удаляют центрифугированием при 3 000 об/мин в течение 10 мин;

· концентрацию глюкозы в супернатантах проб, осажденных цинковой смесью, определяют энзиматическим методом с глюкозооксидазой (методика описана ниже);

· концентрацию молочной кислоты в супернатантах проб, осажденных ТХУ, определяют по реакции с п -оксидифенилом (методика описана ниже).

7. Об интенсивности гликолиза судят по убыли глюкозы и по приросту молочной кислоты.

8. Делают выводы о влиянии цитрата (в присутствии и в отсутствие АМР) на скорость гликолиза.







Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2024 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных