Эффективная концентрация определяемого вещества

Следует позаботиться об обеспечении оптимальных условий анализа с целью уменьшения ошибок.

В иммунном анализе определяемое вещество должно участвовать в равновесии связывания с распознающей молекулой. Если это связывание нарушено или если определяемое вещество вовлечено в связывание с другими молекулами, эффективная концентрация определяемого вещества оказывается заниженной. Во многих случаях определяемое вещество в пробе существует как в свободной, так и в комплексной формах; например, многие гормоны могут быть в равновесии с комплексом гормон-глобулин или гидрофобные стероиды могут быть распределены в липидных полостях. В первом случае эффект обычно преодолевают, добавляя блокирующий агент, тогда как липидный захват разрушают присоединением селективных поверхностно-активных веществ.

Однако, если не позаботиться о том, чтобы все определяемое вещество в пробе было в свободном виде, тогда предварительная обработка (или хранение) пробы может существенно влиять на результат. Тироксин (Т4) и многие другие малые молекулы почти полностью связаны с белком, но вытесняются с помощью неэтерифицированных жирных кислот. Поскольку эти жирные кислоты образуются при хранении пробы из-за воздействия липаз, то определение тироксина может стать скорее способом оценки возраста пробы, чем уровня определяемого вещества.

Комплексообразование может также включать ионы, а не белки или липиды, но в этом случае отсутствие комплекса может быть источником проблем, поскольку многие белковые определяемые вещества содержат центры связывания двухвалентных катионов, и антитела, выращенные на эти белки in vivo, могут распознавать конфигурацию, удерживаемую катионным комплексом (главным образом, Са2+ или Mg2+); таким образом, в отсутствие этих катионов конформация может измениться, так что распознавание с антителом становится неэффективным и анализ терпит неудачу.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: