Глубинное выращивание в монослое

При глубинном культивировании клеток применяют следующие условия рН 7,2 - 7,4, t 36 - 37,5°C. Контроль за развитием клеток проводят с помощью прямых(подсчет) и непрямых методов(по мутности, по определению общего белка). Посевной материал, его качество сказываются на скорости роста клеток. Рассмотрим в качестве примера технологии культивирования клеток человека и животных получение вирусной вакцины Солка (против полиомиелита) из тканевой культуры почек обезьяны. Ткань коркового слоя свежих почек измельчают и суспендируют в среде 199, затем многократно обрабатывают по 20 мин 0,5%-ным раствором трипсина при рН среды 7,6, чтобы ферментативно гидролизовать ткани и разделить клетки. Суспензию центрифугируют и клетки суспендируют в той же среде с добавлением плазмы телячьей крови или гидролизата лактоальбумина. Суспензию клеток инкубируют 5 суток в особых сосудах, где за это время на их стенках образуется однослойная пленка клеток. Когда клетки вырастут, жидкую фракцию сливают, клетки промывают изотоническим раствором поваренной соли, добавляют свежую среду и засевают её соответствующим вирусом полиомиелита. После 3-суточного инкубирования клетки полностью разрушаются, и вирусы переходят в раствор. Остатки клеток удаляют центрифугированием, и оставшийся раствор используют для вакцинации. Для сохранения вакцину замораживают.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: