Определить осахаривающую активность ферментного препарата грибного происхождения

Гидролиз и осахаривание крахмала спомощью ферментного препарата грибного происхождения ведут аналогично методике с использованием ферментного препарата бактериального происхождения. С учетом кислотоустойчивости ферментных препаратов грибного происхождения по окончании гидролиза крахмала к реакционной смеси добавляют 1 н раствор соляной кислоты (10 мл для инактивации ферментов Аsр. аwaтоriе и 5 мл – Аsр. niger). Соответственно изменяется количество вносимого едкого натра в процессе определения содержания редуцирующих cахаров в полученном гидролизате: при анализе препаратов Аsр. аwaтоriе вносится 9 мл 1 н раствора едкого натра и 10 мл воды, а при анализе препаратов Аsр. niger – 14 мл 1 н раствора едкого натра и 10 мл воды.

Расчет осахаривающей активности (ОС) ведут по формуле:

, ед/г (1.14)

где V_к – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, использованного на титрование контрольного раствора;

V_о – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, использованного на титрование опытного раствора;

50 – коэффициент пересчета количества гидролизованных гликозидных связей на микроэквиваленты;

m₂ – количество ферментного препарата в растворе, использованном в эксперименте, г;

t – длительность гидролиза (10 минут).

Отклонения при параллельном определении могут составлять не более 10 %.

Результаты измерений и расчетов заносят в таблицу 5.

3) определить осахаривающую активность солода

В коническую колбу на 100 мл вносят 20 мл 1 % раствора крахмала, приготовленного на фосфатном буфере (рН 4,7) и помещают на 10 минут в термостат при температуре 30 °С. Затем в колбу вносят 10 мл рабочего раствора солода, приготовленного на фосфатном буфере (рН 4,7) и предварительно нагретого до 30 °С. Общий объем реакционной смеси должен составлять 30 мл, поэтому недостающий объем доводят дистиллированной водой. Колбу с реакционной смесью выдерживают в термостате 10 минут для гидролиза и осахаривания крахмала. Затем в колбу с реакционной смесью добавляют 1 мл 1 н раствора соляной кислоты для инактивации фермента.

В полученном гидролизате определяют содержание редуцирующих сахаров. Для этого гидролизат количественно переносят в коническую колбу для титрования на 250 мл. В колбу пипеткой вносят 20 мл 0,1 н раствора йода и сразу за этим – 60 мл 0,1 н раствора едкого натра (щелочь вносят по каплям при перемешивании!). Колбу с опытным раствором оставляют в темном месте на 15 минут, а затем нейтрализуют раствор 2 мл 25 % раствора серной кислоты. Избыточный йод оттитровывают 0,1 н раствором тиосульфата натрия.

Одновременно готовят контрольный раствор. В колбу на 250 мл вносят 20 мл 1 % раствора растворимого крахмала, 1 мл 1 н раствора соляной кислоты, а также такой же, как и для опытного раствора, объем рабочего раствора солода (5-10 мл). Затем в колбу пипеткой вносят 20 мл 0,1 н раствора йода и сразу за этим - 60 мл 0,1 н раствора едкого натра (щелочь вносят по каплям при перемешивании!). Спустя 15 минут выдержки в темном месте контрольный раствор нейтрализуют 2 мл 25 % раствора серной кислоты. Избыток йода оттитровывают 0,1 н раствором тиосульфата натрия.

Количество образовавшегося редуцирующего сахара (мальтозы) определяют по разности объемов тиосульфата натрия, использованного на титрование контрольного и опытного растворов (эта разность должна составлять от 1 до 4 мл!).

Полученные экспериментальные данные используют для расчета осахаривающей активности (ОС) по формуле:

, ед/г (1.15)

где 0,95 – коэффициент, учитывающий долю мальтозы в смеси редуцирующих сахаров;

V_к – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, использованного на титрование контрольного раствора;

V_о – объем 0,1 н раствора тиосульфата натрия, использованного на титрование опытного раствора;

m₂ – количество солода в рабочем растворе, использованном в эксперименте, г;

t – длительность гидролиза (10 мин).

Отклонения при параллельном определении могут составлять не более 10 %.

Результаты измерений и расчетов заносят в таблицу 5.

Вопросы к коллоквиуму

по теме «Предферментационные процессы»

1. Общее представление о предферментационных процессах.

2. Получение посевного материала на примере дрожжевой культуры.

3. Питательные среды. Их классификация по физическому состоянию и составу.

4. Сырье для составления питательных сред.

5. Источники углерода, азота и фосфора в составе питательных сред. Макроэлементы в составе питательных сред

6. Микроэлементы в составе питательных сред и их источники.

7. Факторы роста и их источники.

8. Методы стерилизации питательных сред.

9. Подготовка сырья в технологии микробного получения этанола.

10. Общие сведения о ферментных препаратах.

11. Ферментативный гидролиз крахмала. Характеристика амилолитических ферментов.

12. Активность ферментных препаратов. Амилолитическая и осахаривающая активность микробных ферментных препаратов и ферментов солода.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: