Пластинчата реакція аглютинації (РА) з сапним кольоровим антигеном

Антиген сапний кольоровий для пластинчатої РА являє собою гомогенну суспензію в буферному розчині інактивованої забарвленої культури збудника сапу. При зберіганні допускається утворення осаду, що перетворюється в гомогенну суспензію при струшуванні. Перед використанням флакони з антигеном витримують протягом 15–20 хвилин при температурі 18-30°С і струшують. Дослідженню на сап не підлягають мутні, гемолізовані сироватки крові.

Досліджувана сироватка крові коней нативна або консервована.

Консервування сироватки крові проводять кристалами борної кислоти (2 ‑ 4% до об’єму сироватки) до отримання насиченого розчину або шляхом одноразового заморожування. Не консервована сироватка крові придатна для дослідження протягом 5 діб з дня взяття із збереженням її при температурі 4 ‑ 8° С. Сироватка, консервована борною кислотою, придатна для дослідження протягом 10 діб, заморожена сироватка протягом 3 діб після одноразового розморожування.

Сироватка сапна для РА і РЗК (позитивна сироватка) виготовляється на біопідприємствах.

Сироватка крові коней неспецифічна неконсервована (негативна сироватка) виготовляється на біопідприємствах.

Фізіологічний розчин – 0,85 % розчин хлориду натрію з рН 6,8 ‑ 7,2. Корекцію рН проводять 10 % розчином соляної кислоти або 10 % розчином гідроокису натрію.

Постановка РА. Реакцію проводять за температурі 18 ‑ 30° С на чистих сухих металевих емальованих пластинках з лунками. На краях пластинки проти кожної лунки записують номер досліджуваної сироватки крові.

Спочатку ставлять контроль антигену з позитивною і з негативною сапними сироватками крові коней, а також контроль антигену на спонтанну аглютинацію (до 0,03 см³ антигену додають 0,03 см³ сироватки або фізіологічного розчину). Досліджувані сироватки крові в дозі 0,03 см³ вносять на дно лунки за допомогою дозатора (піпетки). В кожну лунку поряд із сироваткою дозатором вносять 0,03 см³ антигену. Потім антиген в кожній лунці змішують з сироваткою ручним змішувачем до отримання однорідної суміші, розмішуючи її по всій поверхні лунки. Пластинку з сироватками і антигеном погойдують протягом 4 хвилин обережними круговими рухами вручну або за допомогою апарату для погойдування діагностичних пластинок.

Облік результатів реакції проводять візуально через 4 хвилини після змішування сироватки крові з антигеном при злегка нахиленому положенні пластинки. Реакцію вважають позитивною при наявності чітко вираженої аглютинації забарвлених сапних бактерій антигену у вигляді дрібних чи великих пластівців при 75–100 % просвітленні рідини (3 ‑ 4 хрести). Реакцію вважають негативною при оцінці менше (3 ‑ 4 хрестів).

++++ (4 хрести) – виражена аглютинація у вигляді великих пластівців рожевого кольору з повним просвітленням рідини;

+++ (3 хрести) – незначні пластівці з не повним (75 %) просвітлінням рідини;

++ (2 хрести) – аглютинат у вигляді дрібних пластівців, з не повним (50 %) просвітленням рідини;

+ (1 хрест) – дрібно зернистий аглютинат, з не повним (25 %) просвітленням рідини;

- (мінус) – відсутність аглютинації, суміш гомогенна, рівномірно забарвлена.

Після обліку реакції пластинки і змішувач дезінфікують занурюючи їх на 5 хвилин в 1 % розчин хлораміну або віркону, потім миють у миючому розчині, споліскують в проточній потім в дистильованій воді, висушують і використовують повторно.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: