Схема розведення гемолізину

Після чого по 0,2 м³ кожного розведення переносять в ряд пробірок, в кожну пробірку добавляють по 0,2 см³ комплементу в розведенні 1: 20, 0,2 см³ 2,5% суміші еритроцитів і 0,4 см³ фіз. р-ну. Штатив з пробірками струшують і ставлять на 10 хв. у водяну баню при температурі 37 ‑ 38° С. Титром гемолізину вважають найбільше його розведення, при якому спостерігається повний гемоліз еритроцитів.

Приготування гемолітичної системи. Гемолітичну систему готують змішуванням в рівних об’ємах, 2,5 % суміші еритроцитів барана та гемолітичної сироватки (гемолізин у подвоєному титрі).

Наприклад, при титрі гемолізину 1:1000 беруть 2:1000, тобто для приготування 100 см³ гемолізину беруть 0,2 см³ гемолізину з ампули і розводять в 99,8 см³ фізіологічного розчину. Отримані 100 см³ розчину гемолізину змішують з 100 см³ суміші еритроцитів. Гемолітичну систему поміщають на 20 хвилин у водяну баню при температурі 37 – 38 °С для сенсибілізації еритроцитів.

Титрування комплементу. Перед постановкою головного дослідження проводять титрування комплементу у бактеріолітичній системі з позитивною сапною і негативною сироватками та 1–2 сироватками з досліджуваної партії.

Позитивну, негативну сироватку та сироватку з партії розводять 1: 10 фізіологічним розчином (1 см³ сироватки та 9 см³ фізіологічного розчину) та інактивують за температурі 60–62° С протягом 30 хв. і розливають по 0,2 см³ в два ряди по десять пробірок.

Відбирають необхідну для даного об’єму досліджень кількість ампул (флаконів) з комплементом, розчиняють препарат у фізіологічному розчині, кількість якого вказана на ампулі (флаконі), зливають в одну ємність і перемішують. Таким чином отримують основний розчин комплементу, який зберігають в холодильнику протягом постановки реакції. З цього розчину готують розведення 1: 20 для титрування.

Для розведення комплементу беруть додатковий ряд пробірок, в яких готують попереднє розведення комплементу, але об’єм збільшують в 10 раз. Потім дозатором переносять по 0,2 см³ розведеного комплементу у всі пробірки кожного ряду і вносять інші інгредієнти, як вказано в таблиці 2.

Титром комплементу в бактеріолітичній системі вважають мінімальну його кількість, яка необхідна для повного гемолізу суспензії еритроцитів в пробірках з негативною та досліджуваними сироватками з антигеном і без антигену, а також в пробірках з позитивною сироваткою без антигену протягом 20 хв. у водяній бані при 37–38°С та затримку гемолізу в пробірках з сапною сироваткою і антигеном.

Таблиця 2

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: