Схема титрування комплементу в бактеріолітичній системі
Компоненти реакції
| Ряд пробірок у штативі
| Номери пробірок
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
| Негативна сироватка в розведенні 1:10
| перший
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| другий
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| Антиген в робочому титрі
| перший
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| другий
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| Фізіологічний розчин
| перший
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| -
| другий
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| Комплемент у розведенні 1:20
| перший
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| другий
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| 0,2
| Водяна баня 20 хв. при 37-38°С
| Гемолітична система
| перший
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| другий
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| 0,4
| Водяна баня 20 хв. при 37-38°С
| Наприклад
| перший
| чг
| чг
| чг
| чг
| пг
| пг
| пг
| пг
| пг
| пг
| другий
| чг
| чг
| чг
| чг
| пг
| пг
| пг
| пг
| пг
| пг
| Додатковий ряд пробірок для попереднього розведення комплементу
| Комплемент у розведенні 1:20
|
| 0,2
| 0,4
| 0,6
| 0,8
| 1,0
| 1,2
| 1,4
| 1,6
| 1,8
| 2,0
| Фізіологічний розчин
|
| 1,8
| 1,6
| 1,4
| 1,2
| 1,0
| 0,8
| 0,6
| 0,4
| 0,2
| -
| Примітка: ЧГ- частковий гемоліз; ПГ- повний гемоліз.
Приготування комплементу. Кількість комплементу для головного досліду визначають за формулою:
де Х - кількість комплементу, необхідна для головного досліду;
Т - титр комплементу в бактеріологічній системі;
П - кількість пробірок в реакції;
20 - розведення комплементу (1:20).
Наприклад, в досліді 200 пробірок, титр комплементу (згідно табл.2) – 0,1.
Тобто, кількість його для проведення досліду:
|
| 0,1
| ·
|
| 1,0 см3
| =
| --------------
|
|
|
|
|
| | | | | | | Необхідна кількість розведеного комплементу для головного досліду дорівнює 40 см3 (0,2 см3·200). Тобто до 1,0 см3 основного розчину комплементу добавляють 39,0 см3 фізіологічного розчину.
Проведення головного дослідження. Сироватки досліджують у розведенні 1: 5, 1: 10 з антигеном та 1: 5 без антигену (визначення антикомплементарності сироватки). При масових дослідженнях допускається постановка реакції в одній пробірці з розведенням сироватки 1: 10 з антигеном. Для дослідження проб в одній пробірці дозатором беруть 0,02 см3 сироватки і 0,18 см3 фізіологічного розчину.
Для дослідження проб у трьох пробірках в першу наливають 0,1 см3 досліджуваної сироватки і додають 0,4 см3 фіз. р-ну (розведення 1: 5). З першої пробірки переносять у другу 0,2 см3 і 0,1 см3 у третю, в яку потім додають 0,1 м3 фіз. р-ну.
При постановці головного дослідження одночасно ставлять такі контролі:
- позитивна сапна і негативна сироватки в тих же розведеннях, що і досліджувані з антигеном і без антигену;
- антиген без сироватки (на антикомплементарність);
- антиген без сироватки і комплемента (на гематоксичність);
- гемолітична система з фізіологічним розчином.
Таблиця 3
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:
|