Выделение чистой культуры.

Чистая культура может быть получена из отдельной колонии или из одной клетки.

Метод выделения из отдельной колонии был предложен Р.Кохом.

Стадии:

· стерильную питательную среду, содержащую агар или желатину, разливают в стерильные чашки Петри

· после застывания среды на неё с помощью пипетки наносят каплю нк

· распределяют нк по поверхности среды шпателем Дригальского

· этим же шпателем протирают поверхность среды последовательно во второй, третьей и четвертой чашках.

· После посева чашки петри помещают в термостат крышками вниз, чтобы конденсационная вода, образовавшаяся на крышке при застывании агара, не помешала получить изолированные колонии.

После инкубации в 1 и 2 чашках – рост м/о сплошной, в 3-4 отдельными культурами.

Рассеивать нк можно так же бактериологической петлёй методом истощающего штриха.

Для получения изолированной колонии микроаэрофильных м/о или факультативных анаэробов используют метод глубинного посева.

Готовят пробирки с жидкой средой и разведения нк. Степень разведения определяется плотностью нк. В пробирку с расплавленной и остуженной средой вносят 0,5-1 мл нк и вращают между ладоней, перемешивая.

Для выделения облигатных анаэробов разведения проводят в расплавленной агаризованной среде, а после заливают поверхность среды смесью парафина и вазелинового масла, что препятствует проникновению воздуха в толщу агаризованной среды.

Также для выделения облигатных анаэробов используют метод вращающихся пробирок Р. Хангейта. Сущность его в том, что посев нк в расплавленную среду производят при постоянном токе через неё инертного газа без кислорода. Затем пробирку помещают горизонтально во вращающийся зажим, среда при этом равномерно распределяется по стенкам пробирки.

Выделение чистой культуры из одной клетки можно произвести с помощью капельного метода с помощью микроманипулятора, а так же с помощью микроселектора.

Капельный метод Линднера – нк разводят таким образом, чтобы в небольшой капле были одиночные клетки м/о, затем готовят препарат «висячая капля» несколько раз и рассматривают под микроскопом. Те капли, в которых присутствует только одна клетка, помещают в термостат во влажную камеру (чашка Петри с мокрой фильтровальной бумагой на дне). Через 12-24 часа вновь микроскопируют. Капли, в которых наблюдается образование микроколоний, осторожно снимают с покровного стекла и переносят в пробирки со стерильной средой.

Выделение отдельных клеток с помощью микроманипулятора. Микроманипулятор – прибор, позволяющий с помощью специальной микро пипетки или микропетли извлекать из суспензии одну клетку. Эти манипуляции производят под микроскопом. Далее готовят препарат «висячая капля» и перемещают отдельные клетки в пробирки со стерильной средой.

Выделение отдельных клеток с помощью микроселектора Перфильева. В микроселекторе имеется стеклянный микрокапиляр, который заполняют исследуемой суспензией клеток. Далее находят в нём участок с одной клеткой и выбивают этот участок в приемник, из которого переносят на стерильную среду.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: