![]() ТОР 5 статей: Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы КАТЕГОРИИ:
|
Спектрофотометрический метод определения содержания белка в сыворотке кровиСущность метода. Определение белков основано на их способности поглощать ультрафиолетовые лучи определенной длины волны. Большинство белков имеет максимум поглощения при длине волны 280 нм. Оборудование.1. Пробирки. 2. Пипетки на 1 и 5 мл. 3. Спектрофотометр. Ход работы.Сыворотку крови разводят физиологическим раствором в 250 раз (0,1 мл сыворотки доводят до 25 мл). Наливают этот раствор в кювету спектрофотометра и измеряют оптическую плотность при 280 нм против физиологического раствора. Построение калибровочного графика.Готовят стандартный раствор белка: 100 мг кристаллического альбумина растворяют в 100 мл физиологического раствора. В 1 мг такого раствора содержится 1 мг (1000 мкг) белка. В пробирки наливают по 0,5; 1; 1,5; 2,5 мл стандартного раствора белка и объем доводят физиологическим раствором до 5 мл. Содержание белка в 1 мл в этих пробирках равняется 100, 200, 300, 400, 500 мкг. Затем определяют оптическую плотность растворов белка в этих пробирках на спектрофотометре. При построении калибровочного графика на оси абсцисс концентрацию белка мкг/мл, а на оси ординат – найденную величину оптической плотности. Исходя из графика, можно вычислить процентный коэффициент экстинкции, поделив оптическую плотность на соответствующую концентрацию. Он дает возможность вычислить содержание белка в пробе, не обращаясь, каждый раз к графику. Обработка результатов. Количество белка в сыворотке выражают в грамм-процентах (г%) и рассчитывают по формуле:
где С – концентрация белка в пробе в мкг/мл (по графику); В – разведение сыворотки (250).
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:
|