Чаще всего используют РТГА, иногда РСК, редко — реакцию нейтрализации и реакцию радиального гемолиза.

Для получения достоверного ответа необходимо исследование парных сывороток, первую из них берут в первые дни болезни, вторую — 7—10 дней спустя.

Диагноз считают подтвержденным, если во второй сыворотке обнаруживают не менее чем четырехкратный прирост антител!

Принцип реакции основан на способности AT связывать различные вирусы и нейтрализовать их, лишая возможности агглютинировать эритроциты.

Типирование вируса проводят в реакции РТГА с набором типоспецифических сывороток.

Результаты реакции учитывают по отсутствию гемагглютинации. Подтипы вируса типа А с антигенами H0N1, MINI, H2N2, H3N2 и другие могут быть дифференцированы в РТГА с набором гомологичных типоспецифических сывороток

При положительной РТГА образуется плотный осадок эритроцитов на дне лунки в виде диска или кольца с ровными краями. Титр антител определяют по последней лунке с положительной РТГА

Вопрос 30

Испражнения больного собирают в стерильный флакон троекратно на протяжении первых 3-5 дней заболевания. Для уничтожения многочисленной бактериальной флоры обрабатывают их антибиотиками (смесь пенициллина со стрептомицином. Содержащая по 100 ЕД/мл каждого антибиотика в растворе Хенкса) в течение суток при 4 градусах,после чего проводят контрольный высев на стерильность. При отсутствии бактерий суспензию испражнений используют для заражения клеточных структур,а при сохранении бактериальной флоры повторно обрабатывают теми же антибиотиками. Заражают одновременно по 2-3 пробирки с первичной культурой клеток(фибробластов эмбриона человека или почек обезьян) и перевиваемой культурой клеток) линии HeLa, амниона человека и др.), посколу одни виды энтеровирусов лучше репродуцируются в первичных, другие- в перевиваемых клетках. Обычно на 2-Зй день после инкубации зараженных клеточных культур при 35 градусах наблюдается полная или частичная дегенерация клеток. При этом интенсивность ЦПД зависит от многих причин: дозы вируса, вида и состояния культуры кйеток и др. В случае слабовыраженного или полного отсутствия ЦПД проводят дополнительно 2-3 пассажа. При отрицательном результате исследование пркращают, при положительном- приступают к идентификации выделенного цитопатогенного агента(вируса). Исследуемый вирус предварительно титруют в той же клеточной культуре. На которой он был выделен. Для реакции нейтрализации берут 100 ЦПД50 данного вируса (за 1 ЦПД50 принимают максимальное разведение вируса, вызывающее дегенерацию не менее 50% клеток культур). Идентификацию энтеровирусов проводят путем серотипирования в реакции нейтрализации в культуре клеток. С этой целью используют смеси диагностических моновалентных сывороток или стандартные поливалентные сыворотки, а затем соответствующие моновалентные сыворотки. Вначале устанавливают принадлежность исследуемого агента к вирусам полиомиелита,Коксаки или,ЕСНО в реакции нейтрализации с поливалентными сыворотками к каждой из Зх упомянутых групп вирусов. Так,если нейтрализация исследуемого материала произошла с поливалентной сывороткой полиомиелита, то на следующем этапе ставят реакцию нейтрализации с моновалентными сыворотками к каждому серотипу данного вируса.

Вопрос 31

Работа в микробиологической лаборатории мед.учреждения проводится с возбудителями инфекционных заболеваний - патогенными микроорганизмами. Поэтому для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутреннего распорядка.

1) Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску из марли. Работа с особо опасными микроорганизмами регламентируется специальной инструкцией и проводится в режимных лабораториях.

2) В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.

3) Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.

4) при случайном попадании заразного материала на стол, пол и пр.место необходимо тщательно обработать дез.раствором

6) хранение, наблюдение за культурами микроорганизмов и их уничтожение должны производиться согласно специальной инструкции. Все культуры патогенных микроорганизмов регистрируют в спец. журнале.

7) по окончании работы руки следует тщательно вымыть, а при необходимости обработать дез. раствором.

Если произошла авария с разбрызгиванием патогенных биологических агентов:

1) все находящиеся в помещении лица немедленно прекращают работу и, задержав дыхание, выходят из заразного помещения в предбокс, плотно закрывают дверь, включают аварийную сигнализацию и сообщают о случившемся руководителю подразделения

2) руки обрабатывают дез раствором или спиртом

3) слизистые глаза, носа и рта обрабатывают препаратами из аварийной аптечки, рот и горло прополаскиваются 70% этиловым спиртом, в нос закапывают раствор марганцовокислого калия 1:100000 или 1% раствором борной кислоты, а при аварии с вирусами затем закапывают интерферон

4) защитную одежду снимают, погружают в дез раствор или в бикс для автоклавирования

5) открытые части тела протирают 70% этиловым спиртом

6) в глаза закапывают средства к которым чувствителен возбудитель (антибиотики)

7) принимают гигиенический душ и одевают чистую одежду.

Вопрос32

Микроскопировать препарат с использованием иммерсионной системы светового микроскопа.

1) на приготовленный и окрашенный препарат нанести каплю иммерсионного масла и поместить на предметный столик.

2) повернуть револьвер до отметки объектива 90.

3) осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла.

4) установить ориентировочный фокус при помощи макровинта.

5) провести окончательную фокусировку препарата микровинтом, вращая его в пределах одного оборота.

6) по окончании работы вытереть масло с объектив и перевести револьверное устройство на малое увеличение (8)

Вопрос34

Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его метиленовым синим, микроскопировать и дать характеристику.Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло наносят каплю физ. раствора, в которую петлей вносят исследуемый материал (его ерут из пробирки с чистой культурой, берут биолог, петлей, предварительно открывая пробирку с культурой в пламени горелки и закрывают ее в пламени горелки) и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно увидеть изолированы бактериал>ные клетки. Если исследуемый материал содержится в жидкой среде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки, не давая капле закипать. Для фиксашн мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3 раза через пламя горелки. Фиксированный мазок окрашивают метиленовым синим - это простой (3-5 мин), промыть водой, высушить и микроскопировать. Посмотреть в микроскоп и определить форму микроорганизмов (вопрос 52), в мазге окрасились микроорганизмы в синий шет.

Вопрос 33

Приготовить фиксированный препарат из чистой культуры микроорганизмов, окрасить его водным фуксином, микроскопировать и дать характеристику.

7. Приготовление мазка. На обезжиренное мылом предметное стекло помещают маленькую каплю водопроводной воды и переносят в нее петлей небольшое количество исследуемого материала. Полученную суспензию равномерно размазывают петлей на площади 1—2 см2

Высушивание мазка. Лучше сушить готовый препарат при комнатной температуре на воздухе или на руке. Тонкий мазок высыхает очень быстро. Можно слегка нагреть в струе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию проводить осторожно, не перегревая мазка, т.к. клетки микроорганизмов деформируются.

9. Фиксация-несколько целей: убить микроорганизмы, т. е. сделать безопасным дальнейшее обращение с ними; обеспечить лучшее прилипание клеток к стеклу; сделать мазок более восприимчивым к окраске, так как мертвые клетки окрашиваются лучше, чем живые. Самым распространенным способом фиксации-термическая обработка (препарат трижды проводят через наиболее горячую часть пламени горелки, держа предметное стекло мазком вверх). Не перегревать мазок, (грубые изменения клеточных структур, а иногда и внешнего вида клеток).

10. Окраска.

Фиксированный препарат помещают на параллельные стеклянные рейки, лежащие над кюветой, и заливают красителем на 1—3 мин. Следят за тем, чтобы во время окрашивания раствор красителя на мазке не подсыхал. В случае необходимости на мазок наливают новые порции красителя. По окончании окраски препарат промывают водой до тех пор, пока стекающая вода не станет бесцветной. Затем препарат высушивают на воздухе или осторожно промокают фильтровальной бумагой, помещают на окрашенный мазок каплю иммерсионного масла и просматривают с объективом 90Х- Для получения более чистых препаратов краситель наливают на мазок, покрытый фильтровальной бумагой.

12. В правильно окрашенном и хорошо промытом препарате поле зрения светлое и чистое, окрашены только клетки микроорганизмов. Фиксировать и окрашивать можно также и препараты «отпечатки». Фиксированные, окрашенные препараты могут храниться длительное время.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: