Разделение углеводов методом бумажной хроматографии

1. На полоске хроматографической бумаги отмечают линию старта (1-1,5 см от края бумаги), а так же места нанесения стандартных растворов углеводов и анализируемой смеси.

2. Микропипеткой наносят на хроматографическую бумагу по 2mл каждого раствора. Нанесение проводят в несколько приемов, следя за тем, чтобы пятно раствора не растекалось более чем на 3 мм. Каждую последующую порцию раствора наносят после полного высыхания предыдущей, что определяют по исчезновению просвечивания бумаги в точке нанесения.

3. Места нанесения образцов высушивают.

4. Параллельно готовят растворитель изопропанол: вода в соотношении 4:1 объемом 20 мл.

5. Растворитель заливают в хроматографическую камеру, герметично закрывают и оставляют на некоторое время для насыщения камеры парами растворителя.

6. Бумажную полоску помещают в хроматографическую камеру. Хроматографическое разделение заканчивают, когда фронт растворителя переместится к противоположному концу полоски бумаги (2-3 см от края).

7. Хроматограмму высушивают.

8. Углеводы идентифицируют путем опрыскивания хроматограммы 1% водным раствором KMnO₄, содержащим 2% Na₂CO₃, и последующего высушивания полоски бумаги при комнатной температуре.

9. Спиртосахара, гликозиды, восстанавливающие, невосстанавливающие сахара дают желтые пятна на пурпурном фоне, а затем (со временем) серые пятна на коричневом фоне.

10. Определяют значения R_f стандартов углеводов и углеводов в анализируемой смеси. Идентифицируют углеводы, содержащиеся в анализируемой смеси.

Оформление работы

К занятию:

1. Кратко законспектировать теоретические данные по лабораторной работе.

Во время занятия:

2. Описать этапы работы.

3. Зарисовать хроматограмму.

4. Описать результаты.

5. Сделать выводы.

Лабораторная работа № 8

Оборудование и материалы:

· спектрофотометр SOLAR;

· кюветы полистирольные;

· термостат;

· центрифуга настольная;

· весы центрифужные;

· пробирки центрифужные;

· пипетки стеклянные на 1 мл и 5 мл;

· микропипетки автоматические;

· цилиндры мерные на 250 мл и 100 мл;

· пробирки стеклянные химические;

· штативы для пробирок;

· бумага фильтровальная;

· бумага миллиметровая;

· палочки стеклянные.

Реактивы:

· сульфат аммония ([NH₄]₂SO₄), насыщенный раствор;

· a-нафтол, 0,1% спиртовой раствор;

· тимол, 1% спиртовой раствор;

· серная кислота (H₂SO₄), конц.;

· трихлоруксусная кислота (ТХУ), 3% раствор;

· орто-толуидиновый реактив;

· рабочий реагент для глюкозооксидазного метода (смесь ферментов: глюкозооксидаза, пероксидаза);

· глюкоза, стандартные растворы: 5,55 ммоль/л, 16,67ммоль/л, 16,00 ммоль/л;

· вода дистиллированная.

Теоретическая часть

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: