Диателическая гипериммунизация.

После вечерней дойки, на «сухое вымя», через молочный катетер в каждую цистерну вводят по 10 мл алтигена (вирус-ящура, инактивированный при 37°С и рН 9,0 в течение 48— 56 часов).'

Цикл диателической иммунизации состоит из 3—5 введе­ний антигена с интервалом 3—4 дня. У коров наблюдается кратковременное. снижение продуктивности, но лактация на-3—4 день восстанавливается.

3,3.3. Получение «иммуного» молока. На второй день: по­сле окончания иммунизации из молока получают сыворотку и проверяют ее активность в реакции серозащиты на мышах. Если сыворотка окажется активной, то в течение 30 дней от коров получают «иммунное» молоко, затем цикл иммуни­зации повторяют.

3.3.4. Сепарирование «иммунного» молока (полученные
сливки используют для пищевых целей).

3.3.5. Створоживание молока (путем добавления 4—5 мл
50% раствора уксусной кислоты на J л обрата).

3.3.6. Отделение молочной сыворотки (белковая масса-
используется для изготовления творога).

3.3.7. Нейтрализация молочной сыворотки (добавлением
4—5 г соды на 1 л).

Фильтрование сыворотки.

3.3.9. Высушивание путем распыления в калорифере (тем­
пература воздуха в зоне распыления 56—95°С).

Фасовка.

3.3.11. Контроль на стерильность, безвредность и специ­
фическую активность.

Иммунолактон содержит вируснеитрализующие антитела к тем типам вируса ящура, которые были использованы для иммунизации коров.

Иммунолактон используют для профилактики и терапии ящура у телят, поросят, ягнят и козлят.

Перед применением его растворяют в стерильном фосфат-но-буферном растворе в соотношении 1:10, вводят подкожно.

3.4. КРОВЬ РЕКОНВАЛЕСЦЕНТОВ

Реконвалесцентами называют естественно переболевших животных. В крови переболевших животных накапливаются вируснеитрализующие антитела и их титры иногда не ниже, чем в крови иммунизированных животных.

Кровь получают непосредственно в хозяйстве от клини­чески здоровых, переболевших или привитых (вакцинирован­ных) животных через 3—4 недели после переболевания или последней вакцинации.

Кровь, взятую из яремной вены с соблюдением правил асептики, смешивают с заранее приготовленным глюкозно-цитратньш раствором в соотношении 1:1 — 1:2. Раствор гото­вят по прописи: натрия хлорида 8,5 г, натрия цитрат 4,0—4,5 г, глюкоза 20,0—40,0, вода дистиллированная — 1000 мл; сте­рилизуют кипячением в течение 10 мин. Для предупрежде­ния размножения в глюкозно-цитратной крови случайно по­павших микроорганизмов на 1 л раствора вносят по 250 тыс. ЕД. антибиотиков (пенициллин и стрептомицин).

Глкжозно-цитратная кровь содержит форменные элемен­ты, плазму и специфические вируснеитрализующие антитела-Ее применяют с профилактической и лечебной целью при ящуре и вирусных «пневмоэнтеритах» молодняка (ринотра-хеит крупного рогатого скота, парагрипп-3, адено-, рео-коро-навирусная, респираторно-синцитиальная инфекция, вирус­ная диарея). Вводят внутрибрюшинно, внутривенно, а ново-

рожденным в первые- сутки жизни ее можно выпаивать
внутрь.,

Кровь восполняет организм новорожденных питательными веществами, энергией, макро- и микроэлементами, фермента­ми, витаминами, гормонами и иммунными глобулинами, ак­тивизирует защитно-адаптационные механизмы, повышает напряженность колострального иммунитета, способствует становлению функций и преодолению морфофункциональной незрелости новорожденных животных.

Глкжозно-цитратную кровь применяют сразу же после приготовления или в течение 8—10 суток при условии хране­ния при 4—8°С

3.5. СЫВОРОТКА РЕКОНВАЛЕСЦЕНТОВ

Для получения сыворотки кровь берут от клинически здо­ровых, переболевших или вакцинированных животных, как правило, во время их убоя на мясокомбинате или убойном пункте хозяйства, а сыворотку отделяют, проверяют и вы­пускают на биопредприятиях или (чаще) в областных и зональных производственных лабораториях.

В качестве консерванта используют фенол (0,5%) или бе-тапропиолактон (0,03%).

Сыворотка реконвалесцентов пригодна для применения
з течение $ месяцев со-дня изготовления при условии хра­
нения при температуре от 2 до 10°С. -.

Препарат применяют в тех хозяйствах, откуда отобраны
дсшоры-реконвалесценты, переболевшие острыми респиратор­
ными и желудочно-кишечными - заболеваниями, а также в
откормочных комплексах, - которые формируются за счет
«сборного» поголовья. ■ ■■-... ' ■.

Нельзя использовать для лечебно-профилактических целей кровь и сыворотку коров из хозяйств неблагополучных по лейкозу.

3.6. КОНТРОЛИ ИММУННЫХ СЫВОРОТОК И ГЛОБУЛИНОВ И ОСОБЕННОСТИ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ

Сывороточные препараты должны быть стерильными, без­вредными и активными.

3.6.1. Контроль на стерильность. Сыворотки и глобулины не должны содержать никаких бактерий и вирусов.

Контроль на отсутствие бактериальной загрязненности осуществляют путем высева определенного количества сыво-26

ротки (глобулина) из каждой серии на МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом, агар Сабуро или среду Чапека. Посевы выдерживают в термостате при 37°С не менее 5 су­ток с последующим пересевом на аналогичные среды. Роста каких-либо микробов не должно быть. В случае наличия ро­ста сыворотку пропускают через фильтр Зейтца, после чего снова проверяют на стерильность. Допускается прогрев сы­вороток лошади при 58+0,5°С в течение 60 мин., сывороток кр. р. скота и свиней — при той же температуре 30 мин.

Контроль на отсутствие вирусов проводится на чувстви­
тельных лабораторных объектах (животные, развивающиеся
куриные эмбрионы и культуры клеток) по отсутствию инфек­
ционного действия. ^

3.6.2. Контроль на безвредность. Его проводят на лабо­раторных животных. Морской свинке массой 350—500 г под­кожно в области живота вводят 10 мл испытуемой сыворотки; и двум белым мышам сыворотку вводят подкожно в области спины в дозе 0,5 мл: Наблюдают за животными 10 дней. Сыворотка считается безвредной, если у животных в месте введения не наблюдают воспаления, омертвления тканей и

животные остаются живы.

При получении сомнительных результатов проводят по­вторный контроль на двойном количестве животных.

3.6.3. Контроль на апирогенность. Его проводят на кро­
ликах, породы шиншилла массой 1,5—2,0 кг. Сыворотку или
глобулин им водят в ушную вену в дозе 1 мл/кг массы. Че­
рез 1, 2 и 3 часа измеряют температуру тела. Она не дол­
жна повышаться более, чем на 0,8°С.

3.6.4. Контроль на специфическую активность. Этот кон­
троль проводят в зависимости от спектра патогенности воз­
будителя на чувствительных лабораторных или естественно-
восприимчивых животных, эмбрионах кур или культурах:
клеток путем постановки реакции нейтрализации или реак­
ции серозащиты.

В реакции нейтрализации разные разведения сыворотки
(глобулина) соединяются в пробирках с заранее оттитрован­
ным количеством вируса (10, 100 или 1000 ЛД.ад), выдержи­
вают в термостате, после чего эту смесь вводят в чувстви­
тельную тест-систему. Оценка активности сыворотки осно­
вана на определении концентрации специфических антител.
Чем выше разведение сыворотки, способное нейтрализовать
инфекционное действие вируса, тем выше активность сыворо­
ток.. ■

В реакция серозащиты. сыворотку вводят чувствительным лабораторным или естественно восприимчивым животным, а через 20—24 час. их и контрольных (непривитых) живот­ных заражают лодтитрованнной дозой вируса, способной вы­звать заболеваемость и гибель непривитых животных.

Сыворотка считается активной и годной к практическому применению, если привитые ей животные остаются здоровы­ми (срок.наблюдения минимум 14 дней), а непривитые забо­левают и погибают (в отдельных случаях допускается пере-болевание).

На каждую проверенную серию сыворотки или глобулина заполняется паспорт, в котором указывают основные техно­логические, лечебно-профилактические и специфические по­казатели, условия хранения, и применения.

Все препараты, содержащие специфические антитела (сы­воротки, глобулины, иммунолактон) имеют, как правило, про­должительный срок хранения (до 5 лет). Они применяются главным образом для лечения. При рациональном примене­нии оказывают быстрый эффект, особенно в тех случаях, ко­гда вирус использует кровь и лимфу для распространения из места внедрения в излюбленные места локализации. Анти­тела, вступая в контакт с вирионом, блокируют его и лишают вирус способности адсорбироваться на» чувствительных клет­ках.

. С профилактической целью сывороточные препараты ис-гюльзуют в ■ тех случаях, когда у животных был контакт с возбудителем (больными животными или инфицированными объектами внешней среды) или при реальной." угрозе заноса возбудителя, т. е. для экстренной профилактики, когда необ­ходимо быстро создать состояние невосприимчивости.

Однако,' продолжительность сывороточного «пассивного» иммунитета обычно не превышает 2—3 недель, поэтому при­менение этих препаратов часто комбинируют с использова­нием вакцин.

Сыворотки и глобулины вводят, как правило, подкожно или внутримышечно, реже' внутривенно. Молодняку первых 2—3 дней жизни их целесообразно выпаивать (2—3 мл на I кг массы), так как в это время антитела способны прони­кать через слизистую оболочку в неизмененном виде.

Следует иметь в виду, что течение вирусных болезней у молодняка часто усугубляется вторичными, «секундарными» инфекциями, вызванными энтеропатогенными эшерихиямй, сальмонеллами, пастереллами, стрептококками, поэтому свое: 28

временное обоснованное применение сывороток против коли-бактериоза, сальмонеллеза, пастереллеза или стрептококка молодняка животных и подтитрованных антибиотиков или комплексных антимикробных препаратов может дать поло­жительный лечебно-профилактический эффект. Так, напри­мер, инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота, как правило, осложняется пастереллезом, поэтому раннее при­менение сыворотки против пастереллеза и подтитрованных антибиотиков ликвидирует секундарную инфекцию (пасте-реллез) и способствует.выздоровлению. При лечении вирус­ных пневмоэнтеритов можно использовать комплексный пре­парат суметролим.

ИНТЕРФЕРОН

Интерферон (ИФН) — это сводное понятие для обозна­чения белков-гликопротеидов, обладающих противовирусной активностью. Существует не один, а несколько интерферо-нов, они образуются1Гклетках под влиянием индукторов.

3.7.1. Классификация ИФН. В зависимости от происхож­
дения различают альфа-интерферон (лейкоцитарный), бета-
интерферон (фибробластный), гамма-интерферон (иммун­
ный).

Альфа- и бета-интерфероны кислотоустойчивы и устойчи­вы к додецилсульфату натрия, их относят к I типу (клас­сический интерферон). Гамма-интерферон продуцируется клетками доноров, предварительно сенсибилизированных ан­тигеном, он кислотолабилен, его относят к интерферону 2 типа (иммунный)..

Интерфероны, полученные в культурах любых клеток вне организма, принято называть экзогенными, а выработан­ные в организме животных или человека — эндогенными.

3.7.2. Индукторы ИФН. Индукторами интерферона явля­
ются живые слабовирулентные или инактивированные РНК-
содержащие вирусы, нуклеиновые кислоты (особенно двухце-
почечная РНК), синтетические полирибонуклеотиды, бакте­
риальные антигены, эндотоксины и липополисахариды, поли­
анионы, некоторые соединения растительного происхожде­
ния, например, низкомолекулярные полифенолы, выделен­
ные из березы и госсипола хлопчатника, некоторые антибио­
тики и красители.

3.7.3. Синтез ИФН. В настоящее вр.емя общепризнано, что

в каждой клетке есть гены, ответственные за синтез интер- \ ферона, но эти гены находятся в состоянии репрессии. ^-

Индуктор вызывает дерепресо.ию гена, с этого участка ДНК снимается информация {транскрипция и-РНК), она идет на рибосомы, точнее на связанные с мембранами поли­сомы, где происходит считывание информации (трансляция и-РНК-ИФН) и в соответствии с кодом из клеточных амино­кислот синтезируется полипептид-интерферойд, который по­сле гликолизирования становится интерфероном.

Все гены интерферона кодируют белки из 166 аминоки­слот с N-концевой сигнальной последовательностью из 20— 23 аминокислот, В зрелых молекулах ИФН эти сигнальные концы отсутствуют и в составе альфа-ИФН установлено при­сутствие 143 аминокислот, бета-ИФН-145 и гамма-ИФН — 146 аминокислот.

По последним данным, альфа-ИФН не имеет в своем со­ставе углевода, не является гликопротеииом.

Наиболее активными продуцентами ИФН являются лей­коциты, особенно лимфоциты (ТиВ) и макрофаги.

3.7.4. Механизм действия ИФН. Интерферон не оказывает прямого антивирусного действия, а индуцирует синтез фер-ме-нтов 2,5-олиго-аденилат-синтетазы и протеинкиназы.1 2,5-олиго-аденилат-синтетаза активирует •эндорибонуклеазу, спо­собную расщеплять вирусные и-РНК, протеинкиназа инги-. бирует синтез вирусных белков, в результате чего ингиби-_ руется репликация вируса.,...)

Кроме jrorpj_ИФН вызывает изменения в^плазматической
мембра'нё клеток,'затрудняя проникновение^ вирусов, и по­
давляет сборку вирионов.-, " -^;
Интерферон оказывает влияние и на иммунную систему.
Он активизирует деятельность Естественных 'Кйллеров-лймфо-
цитов периферической крови, которые могут лидировать за­
раженные вирусами клетки, усиливает' фагоцитарную дея­
тельность макрофагов, подавляет активность Т-лимфоцитов-
супрессоров и усиливает синтез некоторых иммуноглобули­
нов.

Интерферон обладает широким антивирусным спектром действия, к- нему наиболее чувствительны вирусы, имеющие суперкапсидные оболочки и липиды.

Однако, интерферон обладает видотканевой специфично­стью, т. е. он проявляет более высокую активность в той системе клеток, которыми был продуцирован.

В основе специфичности ИФН по отношению к пилу

ина — специфичность взаимодействия ИФН с рецепторами *Т клеток. Однако, имеются исключения: человеческий интер­ферон способен защитить бычьи клетки, а свиной — клетки

человека.

Интерферон более надежно защищает неинфицированные-клетки, поэтому эффективен при раннем применении.

Интерферон обладает не только противовирусным дейст­вием, он регулирует различные механизмы иммунного отве­та: стимулирует фагоцитоз, проявляет антимикробные свой­ства, влияет на синтез антител, подавляет рост опухолерод- ных клеток, обладает антистрессовым и радиозащитным дей­ствием.

3.7.5. Получение интерферона. Его получают с помощью лейкоцитов или макрофагов. Их вначале обрабатывают ма­лыми дозами (0,5 ЕД/мл) ИФН — праймируют, затем вво­дят индуктор. В качестве индуктора наиболее часто исполь­зуют парагриппозный вирус Сендай или вакцинный штамм «Н» вируса болезни Ньюкасла. После того, как в культуре клеток образуется максимальное количество ИФН, вирус-индуктор инактивируют за счет подкисления среды. Препарат должен быть стерильным и активным.

Активность ИФН определяют в культуре клеток по наи­высшему разведению препарата, предохраняющему клетки от разрушения вирусом везикулярного стоматита.

Наивысшие концентрации ИФН образуются в культуре макрофагов — до 1:4000 (4000 ЕД/мл).

В настоящее время в нашей стране отработана биотехноло­гия производства интерферона с помощью трансформирован­ного штамма эшерихии, полученного методом генной инжене­рии.

В США в 1983 г. ген бета-ИФН встроили в геном вируса

ядерного полиэдроза и при заражении насекомых таким трансформированным штаммом вируса получают большой выход интерферона человека из клеток насекомых.

3.7.6. Практическое применение ИФН. Экзогенный интер­ферон наиболее активен при раннем применении, особенно при локальных вирусных инфекциях кожи, слизистых оболо­чек, глаз. В медицине применяется при герпесе и гриппе.

До недавнего времени интерферон считали совершенно безвредным препаратом. К сожалению, накопились данные о том, что он может вызывать и нежелательные эффекты: повышение температуры, гипотония, миалгия, тахикардия, нарушение функции печени.

В ветеринарной практике экзогенный интерферон с пола­дь жительными результатами испытан при острых респиратор­ных болезнях телят и птиц, однако наиболее перспективно применение индукторов эндогенного интерферона.

В качестве индукторов используют живые вакцины из слабовирулентных штаммов. Они быстро индуцируют выбра­ковку ИФН и уже через 4—8 часов после введения защища­ют организм от вирусной инфекции. ИФН обнаруживается в крови в течение 24—36 час, в паренхиматозных органах — до 4 суток, т. е. он обусловливает защиту организма от виру­сов еще до появления в организме специфических вирусней-трализующих антител.

При отсутствии специфической вирусвакцины следует ис­пользовать другие индукторы, наиболее доступным и испы­танным из которых является вакцина из штамма «Н» вируса болезни Ньюкасла. Имеются данные, что она защищала жи­вотных от экспериментального ящура и болезни Ауески.

В качестве индукторов эндогенного интерферона можно использовать микробные липополисахариды (пирогенал, про-дигиозан) и бактериальные антигены.

Эффективным может -быть комбинированное применение экзогенного. интерферона, сывороточных препаратов, индук­торов интерферона и химиотерапевтических препаратов, на­пример, лицам, укушенным явно бешеным животным, вво­дят антирабическнй гаммаглобулин, интерферон, фермент • РНК-азу, а затем антирабическую вакцину.,

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: