ТОР 5 статей:
Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия
Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века
Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка
Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы
КАТЕГОРИИ:
- Археология
- Архитектура
- Астрономия
- Аудит
- Биология
- Ботаника
- Бухгалтерский учёт
- Войное дело
- Генетика
- География
- Геология
- Дизайн
- Искусство
- История
- Кино
- Кулинария
- Культура
- Литература
- Математика
- Медицина
- Металлургия
- Мифология
- Музыка
- Психология
- Религия
- Спорт
- Строительство
- Техника
- Транспорт
- Туризм
- Усадьба
- Физика
- Фотография
- Химия
- Экология
- Электричество
- Электроника
- Энергетика
Определение протеолитических ферментов
Некоторые микроорганизмы при росте на питательных средах выделяют протеазы, под действием которых молекулы белка расщепляются до промежуточных продуктов распада – пептонов, альбумоз, полипептидов. Под действием других ферментов эти продукты распадаются на отдельные аминокислоты. Некоторые патогенные виды микробов с выраженной протеолитической активностью расщепляют белки до конечных продуктов — индола, сероводорода, аммиака. Индол и сероводород имеют наибольшее значение при определении вида микроорганизма. Для изучения протеолитических свойств микробов исследуемую культуру высевают на питательные среды, содержащие тот или иной белок, например, на МПБ, МПЖ, молоко, на мозговую среду и другие.
Определение сероводорода. Под пробку пробирки с МПБ и исследуемой культурой помещают полоску индикаторной бумаги, пропитанной ацетатом свинца (уксуснокислым свинцом). Индикаторная бумага не должна касаться питательной среды. В положительных случаях образующийся сероводород вступает в соединение с бесцветным ацетатом свинца. Образуется сульфид свинца, который придает индикаторной бумаге черно-бурое окрашивание. (Рецепт приготовления индикаторной бумаги: полоски фильтровальной бумаги помещают в раствор следующего состава — дистиллированная вода 100 мл, ацетат свинца 20 г, бикарбонат натрия 1 г. Бумагу высушивают, нарезают полосками шириной 0,4 см и длиной 5-6 см. Хранят в банке из темного стекла).
Определение сероводорода можно также проводить, учитывая рост культуры на комбинированных плотных средах Клиглера, Олькеницкого. Если выделяется сероводород, то в этих средах он взаимодействует с сернокислым железом (солью Мора). Образуется сульфид железа черного цвета, столбик среды чернеет.
Определение индола. Индол можно обнаружить различными методами. Наиболее доступным и удобным считают метод с использованием индикаторных бумажек, приготовленных по одному из следующих рецептов:
- фильтровальную бумагу пропитывают горячим 12% водным раствором щавелевой кислоты, высушивают на воздухе, разрезают на полоски и хранят в банке из темного стекла. Чтобы выявить индол, бумажку помещают под пробку пробирки с МПБ. При наличии индола нижняя часть бумажки окрашивается в бледно-розовый цвет;
- фильтровальную бумагу пропитывают теплым раствором, состоящим из парадиметиламинобензальдегида – 0,5 г, спирта этилового 96% -50 мл, концентрированной фосфорной или соляной кислоты – 10 мл (реактив Эрлиха). Бумагу высушивают, разрезают на полоски и хранят в банке из темного стекла. Цвет бумажек желтый. При наличии индола нижняя часть бумажки окрашивается от серо-розового до интенсивно малинового.
Индол можно определить также с помощью реактива Эрлиха, не пользуясь индикаторными бумажками. С этой целью к 1 мл 2-суточной бульонной культуры добавляют равный объем эфира и интенсивно встряхивают. Затем в пробирку наливают каплями по стенке реактив Эрлиха. При наличии индола на границе между эфиром и бульонной культурой образуется яркое малиновое кольцо.
Определение аммиака проводят с помощью красной лакмусовой бумажки, которая в присутствии аммиака синеет, из-за образовавшегося нашатырного спирта.
Определение гидролиза мочевины ферментом уреазой проводят на специальных дифференциально-диагностических средах, содержащих мочевину и индикатор (среда Кристенсена с индикатором фенол-рот, 3-х сахарный агар Олькеницкого). При расщеплении мочевины среды окрашиваются в малиновый цвет (Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa).
Мясо-пептонный желатин используют для изучения протеолитических свойств микроорганизмов. Культуры микробов, обладающие ферментом желатиназой, вызывают разжижение питательной среды. При этом микробы с аэробным типом дыхания разжижают МПЖ сверху, факультативные – по линии укола «чулком», анаэробы – на дне пробирки. Микробы со слабовыраженными протеолитическими свойствами в МПЖ образуют от линии посева едва заметные боковые отростки. При этом такой рост у аэробов характеризуют как «елочка верхушкой вниз», у факультативных анаэробов – рост в виде «ламповой щетки», а анаэробы растут в виде «елочки верхушкой вверх». Микробы с отсутствием протеолитических ферментов растут в МПЖ, не изменяя ее: аэробы – в виде кнопки на поверхности среды, факультативные – растут по уколу, анаэробы – на дне пробирки. Культивирование проводят при 22 °С.
Посев в молоко позволяет определить у микроба наличие фермента казеазы. При наличии казеазы происходит гидролиз казеина до образования пептонов. Это вызывает просветление среды и носит название пептонизация молока.
Протеолитические свойства у анаэробов определяют по почернению мозговой среды.
Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: