КУЛЬТУРАЛЬНЫЙ МЕТОД ИССЛЕДОВАНИЯ В МИКРОБИОЛОГИИ – продолжение – Выделение чистой культуры аэробных бактерий

Цель:

1. Освоение методов посева инокулята

2. Проведение II этапа выделения и идентификации чистой культуры аэробных бактерий

3. Уяснение основных этапов идентификации бактерий

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ МИКРООРГАНИЗМОВ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ

Для изучения свойств микроорганизмов, определения их систематического положения, необходимо прежде всего изолировать отдельные виды микробов и вырастить их в виде так называемых "чистых культур” а затем идентифицировать, т.е. установить соответствие определенных микроорганизмов видам, описанным в специальных определителях..

Посев инокулята

Посев инокулята является первым этапом исследования. В прак­тической работе для получения "чистых культур" микроорганизмов используют одну из модификаций метода высева на чашки со сре­дой. Эти методы основаны на том, что отдельные микрорганизмы иммобилизуются на поверхности или в глубине питательной среды, в которую добавлен aгар пли какое-нибудьдругое гелеобразующее вещество.

1. Посев петлей: посевной материал втирают петлей в поверхность
среды у края чашки, избыток снимают, проколов петлей aгap. Оставшийся материал рассеивают параллельными штрихами по стерильной поверхности среды. Это нaиболее распространенный способ посева.

2. Посев шпателем: материал наносят на поверхность среды петлей
или пипеткой, а затем стеклянным или металлическим шпателем тща-
тельно втирают его по всей поверхности агара. При этомлевой рукой
придерживают слегка приоткрытую крышку и одновременно враща-
ют чашку. После посева металлический шпатель прокаливают в пла-­
мени горелки, а стеклянный помещают в дезинфицирующийраствор.

3. Посев тампоном: тампон с исследуемым материалом вносят в
чашку и круговыми движениями втирают его содержимое в поверх-­
ность среды, одновременно вращая тампон и чашку.

4. Посев на секторы: дно чашки расчерчивают на секторы, посев
производят зигзагообразными движениями от края чашки к центру
так, чтобы штрихи с одного не переходили на другой.

5. Посев газоном: 1 мл исследуемого материала (жидкая бульонная
культура или взвесь микробов в физиологическом растворе) наносят
пипеткой на поверхность среды и тщательно распределяют жидкость
по всей ее поверхности. Избыток материала отсасывают пипеткой и вместе с ней помещают в дезинфицирующийраствор.

После посева чашки закрывают и переворачивают их вверх дном. Надписи на чашках делают со стороны дна, а на пробирках - в верх­ней части.

При посеве инокулята из пробирки в пробирку обе пробирки (с посевным материалом и со средой) держат слегка наклонно в в левой руке между большим и указaтельным пальцами так, чтобы края пробирок были на одном уровне. Бактериальную петлю держат как писчее перо. Петлю вертикально прокаливают в пламени горелки. Пробки из пробирок вынимают правой рукой, зажимая их между мизинцем и ладонью. Вынув пробки, края пробирок обжигают в пламени горелок. Прокаленную петлю вводят через пламя горелки в пробирку с посевным материалом, охлаждают и небольшое количество посевного материала осторожно переносят в пробирку со средой

При посеве на жидкую среду петлю слегка погружают в жидкость и растирают посевной материал на стенке пробирки, после чего смывают его средой. Для посева жидкого материала можно использовать пипетки (пастеровские или градуированные)

При посеве на скошенный агар (рисунок) материал наносят штрихообразными движениями снизу вверх, начиная с конденсационной воды, если агар или желатин разлит в пробирки столбиком, то посев производят уколом, прокалывая петлей с посевным материалом столбик до дна.

После посева петлю извлекают из пробирки, пробирку закрывают, предварительно проведя ее края через пламя горелки. Петлю прокаливают.

При выделении чистых культур аэробов можно использовать не только методы, основанные па механическом разобщении бактерий, но и методы, основанные на различиях бактерий по биологическим свойствам. Так, например, некоторые подвижные бактерии могут быстро распространяться по слегка влажной поверхности питатель­ной среды, благодаря этому можно очистить их от неподвижных ви­дов микробов.

Иногда при выделении микроорганизмов из природных популяций полезно включить в среду вещества, избирательно подавляющие рост тех или иных микробов. Например, добавление полиеновых антибиотиков (нистатина) в среду используется для очистки бак­териальных культур, сильно загрязненных грибами.

Посевы инкубируются в термостате 18-24 ч. В течение этого вре­мени из отдельных микробных клеток формируются изолированные колонии.

Колония - это популяция микробных клеток одного вида, сформировав­шаяся в результате деления одной микробной клетки в условиях культивирования на плотной питательной среде при оптимальной температуре.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: