Изучение биохимических свойств выделенных микроорганизмов

Биохимические свойства выделенных микроорганизмов изучают на третьем этапе. Культуру микроорганизмов, выросшую на скошен ном агаре, проверяют на чистоту путем микроскопии мазков, окра­шенных по Граму. При микроскопии обращают внимание на форму микроба, величину, расположение клетки. Специальными окраска ми выявляют споры, капсулы, включения и жгутики

Для идентификации культур, т.е. установления вида и типа бак­терии помимо морфологических и культуральных признаков изу­чают биохимические, антигенные и другие свойства

Определение протеолитических свойств микробов. Действие протеолитических ферментов, т.е. способность микроорганизмов расщеп­лять белки, изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой пептоном. При посеве уколом в столбик желатиновой среды микро­бы, разлагающие желатин, разжижают среду. Действие микроорга­низмов, разлагающих казеин (молочный белок), проявляется в пептонизации (просветлении) молока, которое приобретает вид молоч­ной сыворотки.

В процессе ферментации пептонов микроорганизмами образуются индол (C_SH₇N), сероводород (H₂S), аммиак (NH₃)H другие соединения. Для обнаружения сероводорода в пробирку с МПБ. после посева исследуемой культуры, помещают под пробку узкую полоску филь­тровальной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свин­ца: уксуснокислого свинца - Рb(СН₃СОО)₂ - 30 г; двууглекислого на­трия – NaHCO₃ - 1г; дистиллированной воды - 100 мл. При наличии сероводорода индикаторная бумага чернеет вследствие образования сернистого свинца (PbS).

Для выявления индола используют индикаторную бумажку, пропи­танную горячим насыщенным раствором щавелевой кислоты (С₂Н₂,О₄). В присутствии индола бумага становится красной. Определение индо­ла можно провести и с помощью реактива Эрлиха, который состоит из парадиметиламидобензальдегида (5 г), очищенной концентрированной фосфорной кислоты (H,PO4 (10 мл) и 96% этилового спирта (50 мл). К 48-часовой бульонной культуре прибавляют 1-2 мл серного эфира, ос­новательно встряхивают и затем прибавляют по стенке пробирки 4-5 капель реактива Эрлиха. Через 1-2 мин появляется ярко-малиновое коль­цо в нижней части эфирного слоя, которое свидетельствует о наличии индола.

Аммиак определяют при помощи увлажненной красной лакмусовой бумажки. В присутствии аммиака бумажка синеет.

Определение сахаролитических свойств микробов. Способность микроорганизмов разлагать сахара и многоатомные спирты с образованием кислоты, а иногда и газа изучают на средах Гисса. В состав этих сред входят пептонная вода, углевод (моносахариды - ксилоза, арабиноза; полисахариды - крахмал, гликоген), многоатомные спирты (глицерин, маннит, сорбит, инозит) и индикатор. Под действием образующейся при разложении углеводы кислоты индикатор изменяет окраску среды. Газообразование определяется по наличию пузырьков газа в толщине полужидких сред или, если среда жидкая, в поплавке (стеклянная трубочка, верхний конец которой запаян). Сахаролитические свойства изучают и на таких средах, как Эндо, Левина, Плоскирева. В состав этих сред входит молочный сахар - лактоза и если микроорганизмы разлагают его до кислоты, то цвет колоний изменяется соответственно индикатору, находящемуся в среде.

Определение ферментов микробов. Биохимическая активность мик­роорганизмов обусловлена их ферментативной деятельностью. Ферменты микроорганизмов являются биологическими катализаторами, определяющими метаболические процессы, протекающие в микроб­ных клетках. Разные виды микроорганизмов нередко отличаются по набору ферментов, которые они способны синтезировать.

Плазмокоагулаза - выявляется в пробирочном опыте по определе­нию скорости свертывания испытуемым микробом цитратной кро­личьей или человеческой плазмы.

Гемотоксин - вызывает лизис эритроцитов. Определяется при посеве испытуемых микробов на кровяной агар. Вокруг колонии наблюдается зона просветления среды.

Лецитипаза - разрушает лецитовителлин яичного желтка. Обна­руживается при посеве испытуемых микробов на желточно-солевой агар (ЖСА) по образованию вокруг колоний зоны помутнения с ра­дужным венчиком.

Гиалуронидаза - расщепляет гиалуроновую кислоту, входящую в состав соединительной ткани. В пробирку с испытуемой культурой внести гиалуроновую кислоту и после 30-минутной экспозиции при 37 ^оС добавить 2 капли крепкой уксусной кислоты. При наличии фермента гиалуроповая кислота утрачивает способность образовывать сгусток.

Фибринолизин - растворяет фибрин плазмы крови добавленной к питательной среде.

Методики постановки опытов по определению ферментов у па-1ых микроорганизмов описаны в соответствующих разделах частной микробиологии.

		Выделение и идентификация чистых культур аэробных и анаэробных бактерий

ПРОВЕДЕНИЕ ЗАНЯТИЯ

Задание

1. Изучить колонии, выросшие на чашках после посева на предыдущем занятии – визуально макроскопически и микроскопически под малым увеличением микроскопа

2. Отобрать изолированную колонию, приготовить мазок из нее, окрасить по Граму, провести микроскопию.

3. Отсеять изолированную колонию на скошенный агар.

4. Зарисовать в тетради вид колоний и окрашенного мазка

2. Записать в схему выделения и идентификации чистых культур аэробных и анаэробных бактерий

Контрольные вопросы

1. Что такое “посев” микроорганизмов и методы посевов?

2. Что называется чистой культурой?

3. Способы получения чистых культур (истощающий посев штрихом, газоном, уколом)

Лабораторное занятие №8

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: