Задание 3. Определение содержания пировиноградной кислоты в плазме крови, как показатель обеспеченности организма витамином В1.

Принцип метода. К числу показателей витаминной обеспеченности организма витамином В₁ относятся: содержание витамина В₁ в крови и моче, изменение активности тиаминсодержащих ферментов – пируватдегидрогеназного комплекса и транскетолазы в крови, содержание пировиноградной кислоты в крови и моче. При недостатке витамина В₁ снижается активность пируватдегидрогеназного комплекса и транскетолазы и увеличивается количество пировиноградной кислоты в крови.

Пировиноградная кислота с дифенилгидразином образует гидразон, дающий в щелочной среде красно-розовую окраску. Интенсивность окраски является пропорциональной концентрации пировиноградной кислоты.

Ход работы. Берут две пробирки. В первую вносят 1 мл крови № 1, в другую – 1 мл крови № 2. После этого в обе пробирки добавляют по 1 мл 0,1 %-го раствора 2,4-динитрофенилгидразина (ДНФГ), перемешивают и ставят на 20 мин в темное место. Через 10 мин добавляют по 1 мл 10 %-го раствора натрия гидроксида и через 10 мин фотометрируют на ФЕКе против контроля (дистиллированная вода) при синем светофильтре.

Данные оптической плотности, полученные на ФЕКе, составили: плазма крови № 1 – 0,6; плазма крови № 2 – 0,9.

По готовому графику определяют количество пировиноградной кислоты в плазме крови, выраженное в мкмоль/л, согласно показаниям ФЕК.

По результатам проведенного эксперимента делают выводы.

Клинико-диагностическое значение. В крови здорового человека содержание пировиноградной кислоты составляет 70 – 140 мкмоль/л, с мочой за сутки выводится 15 – 25 мг пировиноградной кислоты. Содержание пировиноградной кислоты (вместе с молочной) увеличивается при интенсивной мышечной работе, а также при патологических процессах, сопровождающихся судорогами.

Выведение пировиноградной кислоты с мочой увеличивается при В₁-витаминной недостаточности, сердечной недостаточности, а также после введения адреналина, стрихнина. Повышение содержания пировиноградной кислоты в крови вызывается токсическим действием ацетилсалициловой кислоты (аспирин), отравлениями ртутью, мышьяком, сурьмой.

Литература

Основная:

1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 2000. - 704с.

2. Хмелевский Ю.В, Губский Ю.И., Зайцева И.Д. и др. Биологическая химия: Практикум. - К.: Вища шк., 1985. - 212 с.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: