Занятие 11 - Изучение свойств ферментов

Цель: изучить общие свойства ферментов.

2.Термолабильность ферментов

Свойства большинства ферментов ингибироваться при кипячении является характерной особенностью, отличающей биологические катализаторы от химических, и называется термолабильностью.

Принцип метода. Фермент сахараза катализирует реакцию гидролитического расщепления дисахарида сахарозы с образованием глюкозы и фруктозы. Наличие конечного продукта реакции глюкозы определяют с помощью реакции Троммера, основанной на восстанавливающей способности глюкозы. Благодаря наличию свободной альдегидной группы глюкоза окисляется до альдоновой кислоты (или соли), восстанавливая сульфат меди до CuOH (желтый осадок) или Cu₂O (красный осадок).

C₅H₁₁O₅COH + 2CuSO₄ + 5NaOH ¾® C₅H₁₁O₅COONa + 2CuOH¯ + 2Na₂SO₄ + 2H₂O; 2CuOH ¾® Cu₂О + Н₂О

Ход работы. В 2 пробирки наливают по 1 мл раствора сахаразы (вытяжки из дрожжей). В 1-й пробирке раствор доводят до кипения, во 2-й - оставляют без кипячения. Затем в обе пробирки добавляют по 2 мл сахарозы, перемешивают. Через 10 минут с содержимым каждой пробирки проводят качественную реакцию на глюкозу - пробу Троммера. К содержимому пробирки прибавляют 4-5 капель 10 % р-ра NaOH, 5-7 капель 7 % р-ра CuSO₄ и нагревают до кипения. В присутствии глюкозы выпадает желтый осадок, который затем переходит в красный. Полученные результаты объясняют.

2. Специфичность действия ферментов

Каждый фермент действует только на определенный субстрат (абсолютная специфичность) или на группу сходных по строению субстратов (групповая специфичность). При абсолютной специфичности незначительные изменения в структуре субстрата приводят к тому, что фермент не оказывает действия на этот субстрат.

Принцип метода: Субстратом для сахаразы является сахароза, крахмал под действием сахаразы гидролизу не подвергается.

Ход работы. В 2 пробирки наливают по 1 мл р-ра сахаразы, затем в одну добавляют 2 мл крахмала, в другую – 2 мл сахарозы, пробирки, на 10 минут помещают в термостат или водяную баню, при 40˚С. После инкубирования проводят реакцию Троммера, в пробирке с крахмалом также проводят реакцию с йодом.

Задание: устно рассказать о структуре, свойствах, классификации ферментов, о влиянии рН среды, температуры, активаторов и ингибиторов на активность ферментов.

Занятие 12 – Количественное определение в биологических объектах витамина С.

Цель: изучить способ количественного определения витамина С.

Ход работы: Взвешивают 1 г пищевых продуктов на технических весах. Навеску тщательно растирают в фарфоровой ступке с песком. К растертой массе прибавляют 9 мл 2 % раствора соляной кислоты. Через 10 минут содержимое перемешивают и фильтруют. Для количественного определения к фильтрату добавляют 1-2 капли 1% раствора крахмала и титруют 0,0001 н раствором йода, до появления синей окраски, сохраняющейся в течение 30 с. Отмеряют количество йода, израсхо-дованного на титрование.

Расчет. Рассчитывают концентрацию аскорбиновой кислоты (в мг на 100 г продукта), учитывая, что 1 мл 0,0001 н раствора йода соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты.

Сравнивают полученные данные с теоретическими по таблице:

Содержание витамина С (в мг/100 г продукта )

Задание: Записать формулы всех витаминов в тетрадь, изучить химическую структуру и устно рассказать биологические функции.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: