Главная | Случайная
Обратная связь

ТОР 5 статей:

Методические подходы к анализу финансового состояния предприятия

Проблема периодизации русской литературы ХХ века. Краткая характеристика второй половины ХХ века

Ценовые и неценовые факторы

Характеристика шлифовальных кругов и ее маркировка

Служебные части речи. Предлог. Союз. Частицы

КАТЕГОРИИ:






Электрофорез белков на агар-агаре




Приборы. Камера для электрофореза с блоком питания. Стеклянные пластинки (25х180 мм). Микропипетка. Сушильный шкаф. Кювета 25х30 см. Ножницы, пинцет.

Реактивы. Раствор агар-агара на буфере, 1%. (Выпускаемый промышленностью агар-агар отмывают дистиллированной водой в течение суток, растворяют в горячем буферном растворе, фильтруют, разливают тонким слоем на предварительно вымытые, обезжиренные стеклянные пластинки, подкладывая на короткие края последних полосы фильтровальной бумаги по ширине стекла и длиной 60-70 мм). Мединал-вероналовый буфер с рН 8,6. Раствор уксусной кислоты в 60% этаноле, 2%. Бромфеноловый синий краситель. Раствор уксусной кислоты 26%. Раствор ацетата натрия в 10%-ном растворе уксусной кислоты, 2%.

В геле агар-агара размеры пор относительно большие, что позволяет белкам свободно мигрировать в нем под действием электрического тока. При этом как носитель он лучше бумаги: из него меньше испаряется вода в процессе электрофореза, не наблюдаются капиллярные явления, что устраняет возможность искажения картины электрофореграмм. Из агар-агара можно готовить блоки различной толщины и плотности, они довольно прочны и прозрачны, что позволяет их фотометрировать без предварительного элюирования краски.

Ход работы. После нанесения агар-агара на пластинки дают ему застыть в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем их помещают в камеру для электрофореза, опуская полосы фильтровальной бумаги, подложенные под гель, в электродные кюветы. Раствор белка (сыворотка крови) в количестве 0,01-0,05 мл предварительно наносят на полосы фильтровальной бумаги (2*20 мм), которые пинцетом помещают на агар-агар по центру пластинки. Камеру закрывают и подключают к блоку питания. Электрофорез проводят при напряжении 150- 170 В и силе тока 1,3-1,6 мА на каждый сантиметр поперечного сечения агар-агаровых блоков в течение 6 ч. По окончании электрофореза пластинку освобождают от фильтровальной бумаги, фиксируют в спиртовом растворе уксусной кислоты в течение 6 ч. Высушивают при 37˚С и окрашивают в течение 18 ч. Окрашенные пластинки промывают трижды в 2%-ном растворе уксусной кислоты по 5-10 мин и один раз в растворе ацетата натрия в 10%-ной уксусной кислоте.

Задание: Устно рассказать о принципах электрофореза, применении.







Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском:

vikidalka.ru - 2015-2022 год. Все права принадлежат их авторам! Нарушение авторских прав | Нарушение персональных данных