ОБОЗНАЧЕНИЕ И СОКРАЩЕНИЯ

Министерство образования и науки Республики Казахстан

Костанайский государственный университет имени А. Байтурсынова

Радостев В.А.

Отработка технологии пробподготовки методом "Сухого пятна"

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА

Специальность 5В070100 -Биотехнология

Костанай, 2016

Министерство образования и науки Республики Казахстан

Костанайский государственный университет имени А. Байтурсынова

«Допущена к защите»

Зав. кафедрой технологии животноводства.

____________ Г. Шайкамал

___ ____________20___г.

ДИПЛОМНАЯ РАБОТА

на тему: «Отработка технологии пробподготовки методом "Сухого пятна"»

Специальность 5В070100 – Биотехнология

Выполнила В.Радостев, студент 4 курса

Очной формы обучения

Научный руководитель И.Тегза, к.с-х.н., доцент

Ст. преподаватель

Костанай, 2016

Содержание

НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящей дипломной работе использованы ссылки на следующие стандарты:

СТ РК 1.12 – 2000 Государственная система стандартизации Республики Казахстан. Документы нормативные текстовые. Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию

ГОСТ 4.492 – 89 Система показателей качества продукции. Препараты биологические ветеринарные. Номенклатура показателей

ГОСТ 7.32 – 2001 Система стандартов по информации, библиотечному и издательскому делу. Отчет о научно-исследовательской работе. Структура и правила оформления

ГОСТ 1770 – 74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 20292 – 74 Колбы мерные вместимостью 100, 200, 500, 1000 мл

ГОСТ 20730 – 75 Питательные среды

ГОСТ 22967 – Шприцы инъекционные вместимостью 2, 5, 10 см³

ГОСТ 28085 – 89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности.

ТУ 38-006-108 – 90 Резиновые пробки

ГОСТ 4233 – 77 Соли

ГОСТ 5962 – 67 Спирт этиловый

ГОСТ 6709 – 72 Вода дистиллированная. Технические условия.

ГОСТ 25336 – 82 Пробирки биологические. Чашки Петри

ГОСТ 92-84 – 75 Предметные стекла

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

В настоящей дипломной работе применяют следующие термины с соответствующими определениями:

Антигены – вещества, несущие признаки генетически чужеродной информации, способные вызывать в организме формирование иммунных белков – антител.

Антитела – белки глобулиновой природы, образующиеся в организме в ответ на введение антигена.

Иммуноглобулины – структурно измененные глобулины сыворотки крови, обладающие свойствами антител.

Клон – культура, возникшая из одной клетки.

Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной признак которой – злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются опухоли.

Макрофаги – большие фагоциты, фагоцитарные клетки, интенсивно фагоцитирующие для организма чужеродный материал. Макрофаги активно участвуют в синтезе антител, кооперируя с Т- и В-лимфоцитами.

Моноклональные антитела – гомогенные антитела, идентичные по физико-химическим свойствам и специфические к одной определенной детерминанте антигена, вырабатываемые только одним клоном иммунных лимфоцитов селезенки.

ОБОЗНАЧЕНИЕ И СОКРАЩЕНИЯ

В настоящей дипломной работе применяются следующие обозначения и сокращения:

ВВЕДЕНИЕ

Лейкоз крупного рогатого скота – хроническая инфекционная болезнь опухолевой природы, основной признак которой – злокачественное разрастание клеток кроветворных органов с нарушением их созревания, в результате чего происходит диффузная инфильтрация органов этими клетками или появляются

опухоли. Вирус лейкоза крупного рогатого скота является возбудителем энзоотического лейкоза крупного рогатого скота, имеющий широкое распространение во многих странах мира [1].

Широкое распространение лейкоза наносит значительный экономический ущерб. Падеж и вынужденная выбраковка животных, утилизация туш и органов при убое, нарушение воспроизводительной функции больных коров, а также ограничения, связанные с реализацией продукции в неблагополучных хозяйствах – все это приводит к потерям, которые особенно ощутимы в племенном животноводстве.

Разработка эффективных способов борьбы и диагностики лейкоза крупного рогатого скота является одной из важнейших задач не только ветеринарной медицины, животноводства, но и биологии, и экологии в целом, имеющих непосредственное отношение к безопасности здоровья человека.

В настоящее время для диагностики лейкоза КРС широко используют такие серологические методы как реакция иммунодиффузии и непрямой вариант иммуноферментного анализа, которые эффективны для оценки распространения ВЛКРС при массовых исследованиях. Тест-системы предназначены для выявления антител, специфичных к вирусу в сыворотке больных животных [2]. Однако данные диагностические методы не всегда эффективны при проведении тестирования отдельных животных, так как при повышении чувствительности реакции, что важно при массовых исследованиях, снижается специфичность. Поэтому, часто при проведении повторных диагностических исследованиях выявляются новые инфицированные животные, которые не были установлены ранее [3].

При качественном улучшении тест-систем, предназначенных для диагностики лейкоза крупного рогатого скота, актуальным становится выбор антител, от качества которых зависит эффективность диагностики. Одним из достижений современной биотехнологии является гибридомная технология, позволяющая получать моноклональные антитела – иммуноглобулины, направленные против уникальных эпитопов патогенов, характеризующиеся постоянными свойствами, т. е. продуцируемые одним определенным клоном и доступные в неограниченном количестве [4].

Антигенсвязывающие центры антител имеют сложную структуру. Антитела данной специфичности воспринимаются иммунной системой организма как клональный продукт, несущий набор эпитопов (идиотипов). Эти эпитопы носят общее название – идиотип, и они могут стимулировать аутологичный антиидиотипический ответ. При введении препарата антител в организм можно получить иммунный ответ в виде антиидиотипов, представляющих собой «внутренний образ» эпитопов начального (экзогенного) иммуногена, способного заменять иммуногены для иммунизации животного и служить антигенами-мишенями для различных иммунологических методов исследования [5].

Целью дипломной работы является получение гибридных клеток продуцирующих антиидиотипические антитела для диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота методом «Сухого пятна»

В соответствии с постановленной целью были определены следующие задачи:

1 Провести иммунизацию линейных мышей с целью выработки специфического ответа на антительный препарат.

2 Определить титр антител.

3 Провести слияние миеломных клеток и лимфоцитов с целью получения гибридных клеток.

4 Провести отбор гибридных клеток продуцирующих антиидиотипические антитела.

5 Провести тестирование сывороток крови методом «Сухого пятна»

Основная часть

Обзор литературы

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: