Кроличьи антитела к идиотипам кролика (аплогенные)

Аллотипы иммуноглобулинов кролика кодируются несколькими генетическими локусами. У аутбредных животных любой донор и реципиент будут иметь различия. При использовании одной линии (донор и реципиент принадлежат к одной и той же линии) требуется высокая степень инбредности, по крайней мере, по локусам а и б.

Легко получить антиидиотипические антитела, направленные к идиотопам антител, специфичных к полисахариду P. vulgaris, у животных, совпадающих по аллотипу. При этом используют ту же мето­дику с применением бактерий, нагруженных антителами, что и для получения аллотипспецифических антител, однако может понадобиться 4-5 курсов иммунизации.

Можно вызвать образование антиидиотипических антител к аффинно-очищенным кроличьим антителам, не прибегая к приготовлению комплексов [13]. При этом в/м вводят 100-200 мкг антител с НАФ (в равных объемах) повторно с интервалами в несколько месяцев.

Более быстрый ответ может быть получен повторными в/в инъекциями очищенных кроличьих антител, связанных с помощью глутарового альдегида с собственными эритроцитами реципиента [13].

1 Собирают свежие эритроциты с помощью гепарина и отмывают стерильным физиологическим раствором.

2 Осадок (15 мкл клеток) суспендируют в 300 мкл кро­личьих антител (300 мкг) в 0,15 М фосфатном буфере и 20 мкл 2,5%-ного глутарового альдегида.

3 Выдерживают суспензию 1 ч при 4°С, затем трижды отмывают и ресуспендируют в 3 мл стерильного физиологического раствора.

Кроликам вводят 1 мл эритроцитов, нагруженных антите­лами, в 1, 7, 10, 13 и 17-й дни. Курс повторяют через 2 недели, кровь берут через 1 неделю после последней инъекции. Специфичность по отношению к идиотипу может быть проверена с помощью реакции гемагглютинации при использовании эритроцитов, нагруженных Ig данного идиотипа (метод отличается высокой чувствительностью).

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: