Bacillus subtilis 23 13 страница

ІІ. Розведення й розсів суспензії бактеріофага.

1. Використовується вихідна суспензію бактеріофага Т4В концентрацією 10⁹ частинок/мл, приготовлену розведенням фаголізату. Розведення бактеріофага проводять у ряді з семи пробірок, які містять по 4,5 мл розведеного 0,5 % NaCl бульйону (рис. 1.2). Вихідну суспензію бактеріофагу розводять до 10^–7 частинок/мл.

2. Висів бактеріофага проводять двошаровим методом. Для цього з розведення 10^–6 і 10^–7 відбирають проби по 1 мл і вносять по 0,5 мл у кожну з двох пробірок з 3 мл розплавленого напіврідкого агару (при температурі 46 °С). Напіврідкий агар попередньо заражають бактеріями, для чого в кожну пробірку вносять по 0,1 мл суспензії E. соli з титром 10⁹ клітин/мл. Вміст кожної пробірки перемішують і виливають у чашку – верхній шар – на нижній шар підсушеного 1,2 % повного агаризованого середовища. Після застигання верхнього шару чашки поміщають у переверненому вигляді в термостат і витримують протягом 18 – 24 год при температурі 28 °С.

0,5 По 0,1 мл на чашку

0,1

^0,1 Двошаровий розсів

0,1

0,1

3 мл

0,7 % ПА

Рис.1.1. Схема титрування й розсіву суспензії E. соli (ПА – повне агаризоване середовище)

0,5 мл

Вихідна суспензія бактеріофага

Т4В з титром 10⁹ частинок/мл

0,5

0,5

0,5

По 4,5 мл розведеного бульйону

Хотингера

0,5

По 0,1 мл

Бактеріальна культура з

титром 10⁹ кл/мл

0,1

3 мл

0,1

3 мл

0,1

3 мл

0,1

3 мл

3 мл

0,7 % ПА

Рис.1.2. Схема титрування й розсіву суспензії бактеріофага Т4В (ПА – повне агаризоване середовище)

Опрацювання результатів

Аналіз отриманих результатів включає в себе підрахунок кількості колоній, що виросли на чашках, і бляшок. Результати заносять у табл. 1. 2 і 1.3. Обчислюють кількість життєздатних бактеріальних клітин і частинок бактеріофага у перерахунку на 1 мл культури E. соli і суспензії фага Т4В. Крім того, варто враховувати:

• Чи є десятикратні розходження між розведеннями 10^–5 і 10^–6, 10–6 і 10^–7 частинок/мл?

• Яка розбіжність результатів між паралельними розведеннями?

• Яка різниця між даними, отриманими двошаровим і поверхневим методами розсіву?

Таблиця 1.2

E. соli

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: