Bacillus subtilis 23 18 страница

7. Висіяти диплоїдні й гаплоїдні штами на поживне середовище для споруляції; петлею зробити густий висів на поверхню середовища (приблизно 1 см²). Вирослу культуру розглядають на наступному занятті;

8. Приготувати у краплині води препарати з культур дріжджів з різною плоїдією; промікроскопіювати диплоїдні клітини, підрахувати кількість вегетативних клітин і асків у кількох полях зору, вивести відсоток споруляції; промікроскопіювати гаплоїдні культури, переконатися у відсутності споруляції; результати занести в табл. 2.1.

7 мл

Стерильна

Суспензія

ПА,

Титр

Рис.2.1. Схема виконання дослідів і виділення клонів (ПА – повне агаризоване середовище)

Таблиця 2.1

Морфологічні особливості диплоїдних і гаплоїдних культур дріжджів

9. Для одержання окремих колоній виснажуючим штрихом у пробірку з 2 мл стерильні води вносять одну петлю дріжджової культури, ретельно перемішують. На твердому середовищі петлею проводять горизонтальний штрих суспензією з пробірки. Петлю обпалюють, охолоджують, проводять нею по поверхні середовища кілька вертикальних штрихів і знову обпалюють. Далі петлю охолоджують і проводять по поверхні середовища горизонтальні штрихи, що перетинають вертикальні, не торкаючи перший горизонтальний штрих. Розсів проводять на двох чашках.

Опрацювання результатів

Аналізи виконують після чотирьохдобового вирощування дріжджів у термостаті за температури 30°С. Визначити кількість вирослих колоній, визначити титр клітин шляхом підрахунку у камері Горяєва і методом висіву на агаризоване середовище, дослідити монотиповість і гетерогенність вирослих колоній візуально й за допомогою бінокулярної лупи (мікроскопа МБС-1). Результати занести у табл. 2.2.

Контрольні запитання

1. Чому дріжджі Saccharomyces cerevisiae є важливим об’єктом біотехнологічних досліджень?

2. Охарактеризуйте морфологічні особливості гаплоїдних і диплоїдних клітин дріжджів.

3. Дайте характеристику метилотрофним дріжджам.

4. Яке практичне значення метилотрофних дріжджів?

5. Які переваги використання метилотрофних дріжджів у порівнянні з хлібопекарськими?

6. Які генетичні відмінності дріжджів і бактерій? У чому їх спільність?

7. Що означає поняття "гаплоїдна", "диплоїдна", "поліплоїдна" клітини?

8. Що означають поняття "штам", "клон", "асоціація"? Які їх спільні і відмінні ознаки?

9. В чому полягає суть методу клонування мікроорганізмів? Як його використовують у практичних цілях?

Література: [1, 2 6, 8,9].

ЛАБОРАТОРНЕ ЗАНЯТТЯ 3

ОДЕРЖАННЯ ГІБРИДІВ І ПРИНЦИПИ ГІБРИДОЛОГІЧНОГО

АНАЛІЗУ

Мета: ознайомлення з методами схрещування клітин мікроорганізмів;виділення гібридів мікроорганізмів; одержання гібридних аскоспор і розсів отриманих аскоспор на чашки.

Обладнання та матеріали: термостат;чашки Петрі з мінімальним(М);повним (П); ацетатним середовищами (А); пробірки з 0,5 мл травного соку равликів (ТСР); 1 пробірка з 1 мл стерильної води; камера Горяєва; шпателя; стерильні піпетки; колба зі стерильною дистильованою водою; два штами дріжджів S. cerevisiae.

Загальні відомості 3.1. Схрещування клітин мікроорганізмів

На основі гібридизації мікроорганізмів можна, по-перше, з'ясувати характер успадкування тієї або іншої ознаки, що визначається ядром або цитоплазмою й залежить від одного або кількох генів і, по- друге, одержати гібриди з цінними для використання у виробництві батьківськими ознаками.

Методи одержання гібридів і вивчення розщеплення в їхньому потомстві визначається особливостями життєвого циклу досліджуваного організму. Гібридизація може здійснюватися як у гетероталічних, так і в гомоталічних організмів.

Не нашли, что искали? Воспользуйтесь поиском: